| 摘要 | 第6-8页 |
| Abstract | 第8-9页 |
| 第一章 绪论 | 第13-29页 |
| 1.1 结直肠癌 | 第13-16页 |
| 1.1.1 结直肠癌的概况 | 第13页 |
| 1.1.2 结直肠癌的研究进展及治疗方法 | 第13-16页 |
| 1.1.3 结直肠癌的危险因素分析 | 第16页 |
| 1.2 Micro RNA与miR -320a的研究进展 | 第16-21页 |
| 1.2.1 micro RNA在肿瘤发生发展中的作用 | 第16-19页 |
| 1.2.2 miR-320a的研究进展 | 第19-21页 |
| 1.3 Sp1的研究进展 | 第21-24页 |
| 1.3.1 Sp1概况 | 第21-23页 |
| 1.3.2 Sp1在肿瘤中的研究概况 | 第23-24页 |
| 1.3.3 Sp1与结直肠癌 | 第24页 |
| 1.4 MACC1的研究进展 | 第24-25页 |
| 1.5 FOXQ1的研究进展 | 第25-26页 |
| 1.6 本课题的选题依据、研究方案、研究目的 | 第26-29页 |
| 1.6.1 选题依据 | 第26-28页 |
| 1.6.2 研究方案 | 第28页 |
| 1.6.3 研究目的 | 第28-29页 |
| 第二章实验材料与方法 | 第29-54页 |
| 2.1 实验材料 | 第29-31页 |
| 2.1.1 细胞系 | 第29页 |
| 2.1.2 实验试剂及耗材 | 第29-30页 |
| 2.1.3 主要实验仪器 | 第30-31页 |
| 2.2 实验方法 | 第31-54页 |
| 2.2.1 细胞复苏、传代 | 第31-32页 |
| 2.2.1.1 细胞复苏 | 第31-32页 |
| 2.2.1.2 细胞传代 | 第32页 |
| 2.2.2 miR-320a稳定过表达细胞株的构建 | 第32-42页 |
| 2.2.2.1 慢病毒表达载体的构建 | 第32-33页 |
| 2.2.2.2 慢病毒表达质粒的筛选及扩增 | 第33-38页 |
| 2.2.2.3 慢病毒表达载体质粒病毒包装、浓缩 | 第38页 |
| 2.2.2.4 慢病毒感染细胞及阳性细胞的筛选 | 第38-40页 |
| 2.2.2.5 qRT-PCR验证稳转细胞miR-320a过表达情况 | 第40-42页 |
| 2.2.3 细胞功能实验 | 第42-44页 |
| 2.2.3.1 细胞增殖实验 | 第42页 |
| 2.2.3.2 细胞克隆形成实验 | 第42页 |
| 2.2.3.3 细胞迁移实验 | 第42-43页 |
| 2.2.3.4 细胞Transwell侵袭实验 | 第43-44页 |
| 2.2.4 免疫印迹（Western Blotting）实验 | 第44-50页 |
| 2.2.4.1 细胞总蛋白提取 | 第44-45页 |
| 2.2.4.2 BCA法测定蛋白浓度 | 第45-46页 |
| 2.2.4.3 蛋白免疫印迹测定蛋白表达情况 | 第46-50页 |
| 2.2.5 实时荧光定量实验（qRT-PCR） | 第50-52页 |
| 2.2.5.1 RNA提取 | 第50页 |
| 2.2.5.2 RNA逆转录 | 第50-51页 |
| 2.2.5.3 实时荧光定量（qRT-PCR） | 第51-52页 |
| 2.2.6 双荧光素酶报告系统验证靶基因 | 第52-54页 |
| 2.2.6.1 双荧光素酶报告基因载体构建 | 第52-53页 |
| 2.2.6.2 荧光素酶报告基因检测的操作方法 | 第53-54页 |
| 第三章 实验结果 | 第54-69页 |
| 3.1 第一部分实验：miR-320a稳定过结直肠癌细胞系的构建 | 第54-57页 |
| 3.1.1 miR-320a过表达组质粒与NC对照组质粒的扩增与检测 | 第54-55页 |
| 3.1.2 稳定过表达细胞系的构建 | 第55-57页 |
| 3.1.3 Real-time PCR检测结直肠癌DLD1细胞与SW620细胞稳定过表达miR-320a的表达情况 | 第57页 |
| 3.2 第二部分实验：miR-320a稳定过表达对结直肠癌的生物学影响 | 第57-64页 |
| 3.2.1 CCK-8实验验证miR-320a稳定过表达抑制结直肠癌DLD1细胞和SW620细胞的生长 | 第57-58页 |
| 3.2.2 克隆形成实验验证miR-320a稳定过表达抑制结直肠癌DLD1细胞和SW620细胞的克隆形成能力 | 第58页 |
| 3.2.3 细胞划痕实验验证miR-320a稳定过表达抑制结直肠癌DLD1细胞和SW620细胞的迁移能力 | 第58-59页 |
| 3.2.4 Tranwell入侵实验验证miR-320a稳定过表达抑制结直肠癌DLD1细胞和SW620细胞的侵袭能力 | 第59-64页 |
| 3.3 第三部分实验:miR-320a下游靶基因的鉴定 | 第64-69页 |
| 3.3.1 相关蛋白变化及m RNA变化 | 第64-67页 |
| 3.3.2 荧光素酶报告系统验证靶基因 | 第67-69页 |
| 第四章 结果分析与结论 | 第69-75页 |
| 4.1 结果分析 | 第69-74页 |
| 4.2 结论 | 第74-75页 |
| 致谢 | 第75-77页 |
| 参考文献 | 第77-85页 |
| 附录 | 第85页 |
| 附录 A：攻读学位期间发表论文 | 第85页 |
| 附录 B：攻读学位期间参与科研项目 | 第85页 |
| 附录 C：缩略表 | 第85页 |
