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长双歧杆菌NCC2705与宿主细胞Caco2相互作用的研究

内容提要第1-7页
英文缩写第7-8页
第1章 绪论第8-18页
   ·双歧杆菌的生物特性第8-10页
   ·双歧杆菌的生物拮抗功能第10-11页
   ·双歧杆菌粘附机制的研究进展第11-14页
     ·粘附素的研究第13页
     ·粘附素受体的研究第13-14页
   ·兼职蛋白第14-16页
   ·研究目的及意义第16-18页
第2章 材料和方法第18-35页
   ·实验材料第18-21页
     ·菌株、细胞系、质粒、培养基第18页
     ·主要试剂第18-20页
     ·实验所需主要试剂盒第20页
     ·主要仪器第20页
     ·引物设计第20-21页
   ·实验方法第21-35页
     ·B.longum NCC2705 与Caco2 细胞相互作用的比较蛋白质组学研究第21-26页
     ·Enolase、Tuf 的克隆与表达第26-29页
     ·人纤溶酶原Plg 的真核表达及与Enolase、Tuf 的体外结合实验第29-31页
     ·Enolase、Tuf 的体外功能验证实验第31-35页
第3章 实验结果第35-50页
   ·B.longum NCC2705 与Caco2 相互作用的比较蛋白质组学研究结果第35-41页
     ·与Caco2 作用前后的B.longum NCC2705 的双向电泳图谱第35-37页
     ·差异蛋白点的质谱鉴定及分析第37-40页
     ·双向电泳中目标基因表达的RT-PCR 验证第40-41页
   ·Enolase、Tuf 的克隆与表达第41-43页
     ·目的片段enolase、tuf 的PCR 扩增第41-42页
     ·重组质粒GST-Eno 、GST-Tuf 的构建与鉴定第42-43页
     ·GST 融合蛋白的表达及纯化第43页
   ·Plg 的真核表达及与目标蛋白的体外结合实验第43-46页
     ·目的片段plg 的PCR 扩增第43-44页
     ·重组质粒Flag-Plg 的构建与鉴定第44-45页
     ·真核表达的Flag-Plg 与Enolase、Tuf 的体外结合实验第45-46页
   ·Enolase、Tuf 体外功能性验证试验第46-50页
     ·目标蛋白竞争性抑制双歧杆菌粘附第46-48页
     ·细胞因子LDH、TNF-α的检测结果第48-50页
第4章 讨论第50-56页
   ·B.longum NCC2705 与Caco2 细胞相互作用的比较蛋白质组学第50-52页
   ·Enolase、Tuf 的克隆与表达第52-53页
   ·真核表达的Plg 与Enolase、Tuf 的体外结合实验第53-54页
   ·目标蛋白Enolase 和Tuf 体外功能验证第54-56页
第5章 结论第56-57页
参考文献第57-65页
攻读学位期间发表的学术论文及取得的科研成果第65-66页
致谢第66-69页
中文摘要第69-72页
Abstract第72-74页

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