| 摘要 | 第4-5页 |
| Abstract | 第5页 |
| 第一章 序言 | 第11-21页 |
| 1 植物遗传转化 | 第11-21页 |
| 1.1 植物遗传转化的发展史 | 第11-12页 |
| 1.2 根癌农杆菌介导的植物遗传转化 | 第12-17页 |
| 1.2.1 根癌农杆菌所介导的植物遗传转化的原理 | 第12-13页 |
| 1.2.2 根癌农杆菌所介导的植物遗传转化的特点 | 第13页 |
| 1.2.3 影响根癌农杆菌转化的主要因素 | 第13-16页 |
| 1.2.4 根癌农杆菌所介导的橡胶树的遗传转化 | 第16-17页 |
| 1.3 HMGR1基因及其转基因的研究进展 | 第17-20页 |
| 1.3.1 HMGR参与的代谢途径 | 第17-18页 |
| 1.3.2 HMGR基因的研究概况 | 第18-20页 |
| 1.4 研究的目的和意义 | 第20页 |
| 1.5 技术路线 | 第20-21页 |
| 第二章 材料与方法 | 第21-35页 |
| 1 植物材料与试剂 | 第21-22页 |
| 1.1 植物材料 | 第21页 |
| 1.2 实验菌种及质粒载体 | 第21页 |
| 1.3 常用的试剂及酶类 | 第21页 |
| 1.4 橡胶树组织培养的条件 | 第21页 |
| 1.5 橡胶树组织培养中所用培养基及其主要成分 | 第21-22页 |
| 2 实验方法 | 第22-35页 |
| 2.1 HbHMGR1基因的克隆 | 第22-27页 |
| 2.1.1 橡胶树总RNA的提取 | 第22-23页 |
| 2.1.2 cDNA链的合成 | 第23页 |
| 2.1.3 橡胶树HbHMGR1基因的扩增 | 第23-24页 |
| 2.1.4 HbHMGR1基因的扩增产物的TA克隆 | 第24-26页 |
| 2.1.5 菌落PCR阳性重组子的酶切鉴定 | 第26-27页 |
| 2.1.6 测序鉴定阳性克隆 | 第27页 |
| 2.2 pCAMBIA2301-35S-HbHMGR1植物表达载体的构建 | 第27-28页 |
| 2.2.1 pCAMBIA2301-MCS空载体,pMD 19-T-HbHMGR1的获得 | 第27页 |
| 2.2.2 pCAMBIA2301-MCS空载体,pMD 19-T-HbHMGR1的双酶切 | 第27-28页 |
| 2.2.3 回收pCAMBIA2301-MCS大片段,pMD 19-T-HbHMGR1的小片段 | 第28页 |
| 2.2.4 回收片段的连接 | 第28页 |
| 2.2.5 连接产物转化 | 第28页 |
| 2.2.6 重组子的PCR鉴定、双酶切鉴定 | 第28页 |
| 2.3 影响根癌农杆菌所介导的HbHMGR1基因遗传转化的因素研究 | 第28-29页 |
| 2.3.1 根癌农杆菌菌液浓度对于橡胶树易碎胚性愈伤组织遗传转化的影响 | 第28页 |
| 2.3.2 根癌农杆菌静置侵染时间对于转化的影响 | 第28-29页 |
| 2.3.3 共培养温度对于橡胶树易碎胚性愈伤组织转化的影响 | 第29页 |
| 2.3.4 共培养天数对于橡胶树易碎胚性愈伤组织转化的影响 | 第29页 |
| 2.3.5 共培养pH对于橡胶树易碎胚性愈伤组织转化的影响 | 第29页 |
| 2.3.6 硫酸卡那霉素、替卡西林浓度对于橡胶树易碎胚性愈伤组织转化的影响 | 第29页 |
| 2.4 抗性愈伤组织的筛选 | 第29-30页 |
| 2.5 抗性胚状体的诱导及其植株再生 | 第30页 |
| 2.6 转化材料的GUS组织化学染色 | 第30页 |
| 2.7 橡胶树易碎胚性愈伤组织细胞活性的测定 | 第30-31页 |
| 2.8 试验数据统计与分析 | 第31页 |
| 2.9 对拟转化橡胶树植株的抗性愈伤进行分子检测 | 第31-33页 |
| 2.9.1 对拟转化橡胶树植株的抗性愈伤材料DNA提取 | 第31页 |
| 2.9.2 检测引物的设计 | 第31-32页 |
| 2.9.3 拟转化材料愈伤uidA基因、nptⅡ基因的PCR检测 | 第32页 |
| 2.9.4 拟转化材料RNA的提取、cDNA的制备 | 第32-33页 |
| 2.10 DNA杂交(Southern blotting) | 第33-35页 |
| 2.10.1 橡胶树DNA基因组酶切 | 第33页 |
| 2.10.2 DNA的印记转移 | 第33-34页 |
| 2.10.3 尼龙膜的固定 | 第34页 |
| 2.10.4 探针的制备 | 第34页 |
| 2.10.5 杂交 | 第34-35页 |
| 第三章 结果与分析 | 第35-54页 |
| 1 植物表达载体pCAMBIA 2301-35S-HbHMGR1的构建 | 第35-38页 |
| 1.1 橡胶树胶乳总RNA的提取、目的基因的测序和序列分析 | 第35-37页 |
| 1.2 载体pMD19-T-HbHMGR1、pCAMBIA2301-MCS载体的双酶切 | 第37页 |
| 1.3 植物表达载体pCAMBIA2301-35S-HbHMGR1的鉴定 | 第37-38页 |
| 2 抗生素对橡胶树热研8-79易碎胚性愈伤组织的影响 | 第38-40页 |
| 2.1 替卡西林对农杆菌、易碎胚性愈伤组织的影响 | 第38-39页 |
| 2.2 硫酸卡那霉素对橡胶树易碎胚性愈伤组织的影响 | 第39-40页 |
| 3 不同的处理方式对于橡胶树热研8-79易碎胚性愈伤组织转化的影响 | 第40-43页 |
| 3.1 根癌农杆菌菌液浓度对于转化的影响 | 第40页 |
| 3.2 侵染时间对于转化的影响 | 第40-41页 |
| 3.3 共培养时间对橡胶转化的影响 | 第41-42页 |
| 3.4 共培养温度对于橡胶转化的影响 | 第42页 |
| 3.5 共培养pH对橡胶转化的影响 | 第42-43页 |
| 4 橡胶树热研8-79抗性易碎胚性愈伤组织的继代筛选 | 第43-45页 |
| 5 抗性易碎胚性愈伤组织的胚状体诱导及其植株再生 | 第45-46页 |
| 6 胚状体及其转化植株的GUS染色情况 | 第46-47页 |
| 7 橡胶树热研8-79抗性易碎胚性愈伤组织的分子检测 | 第47-52页 |
| 7.1 抗性易碎胚性愈伤组织的DNA提取 | 第47-48页 |
| 7.2 抗性易碎胚性愈伤组织的PCR检测 | 第48-49页 |
| 7.3 抗性易碎胚性愈伤组织RNA的提取,及其HbHMGR1基因的RT-PCR | 第49-51页 |
| 7.4 抗性材料的Southern blotting实验 | 第51-52页 |
| 1 转化条件对橡胶树易碎胚性愈伤组织的影响 | 第52页 |
| 1.1 转化所用外植体的选择 | 第52页 |
| 1.2 培养条件对外植体的影响 | 第52页 |
| 2 转化条件对于转化效果的影响 | 第52-53页 |
| 3 转化过程对于材料的影响 | 第53页 |
| 4 HMGR基因转化对于植株的影响 | 第53-54页 |
| 第五章 结论 | 第54-55页 |
| 参考文献 | 第55-60页 |
| 附表1 | 第60-61页 |
| 附表2 | 第61-62页 |
| 致谢 | 第62页 |
