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橡胶树HbHMGR1基因克隆、易碎胚性愈伤组织遗传转化和植株再生研究

摘要第4-5页
Abstract第5页
第一章 序言第11-21页
    1 植物遗传转化第11-21页
        1.1 植物遗传转化的发展史第11-12页
        1.2 根癌农杆菌介导的植物遗传转化第12-17页
            1.2.1 根癌农杆菌所介导的植物遗传转化的原理第12-13页
            1.2.2 根癌农杆菌所介导的植物遗传转化的特点第13页
            1.2.3 影响根癌农杆菌转化的主要因素第13-16页
            1.2.4 根癌农杆菌所介导的橡胶树的遗传转化第16-17页
        1.3 HMGR1基因及其转基因的研究进展第17-20页
            1.3.1 HMGR参与的代谢途径第17-18页
            1.3.2 HMGR基因的研究概况第18-20页
        1.4 研究的目的和意义第20页
        1.5 技术路线第20-21页
第二章 材料与方法第21-35页
    1 植物材料与试剂第21-22页
        1.1 植物材料第21页
        1.2 实验菌种及质粒载体第21页
        1.3 常用的试剂及酶类第21页
        1.4 橡胶树组织培养的条件第21页
        1.5 橡胶树组织培养中所用培养基及其主要成分第21-22页
    2 实验方法第22-35页
        2.1 HbHMGR1基因的克隆第22-27页
            2.1.1 橡胶树总RNA的提取第22-23页
            2.1.2 cDNA链的合成第23页
            2.1.3 橡胶树HbHMGR1基因的扩增第23-24页
            2.1.4 HbHMGR1基因的扩增产物的TA克隆第24-26页
            2.1.5 菌落PCR阳性重组子的酶切鉴定第26-27页
            2.1.6 测序鉴定阳性克隆第27页
        2.2 pCAMBIA2301-35S-HbHMGR1植物表达载体的构建第27-28页
            2.2.1 pCAMBIA2301-MCS空载体,pMD 19-T-HbHMGR1的获得第27页
            2.2.2 pCAMBIA2301-MCS空载体,pMD 19-T-HbHMGR1的双酶切第27-28页
            2.2.3 回收pCAMBIA2301-MCS大片段,pMD 19-T-HbHMGR1的小片段第28页
            2.2.4 回收片段的连接第28页
            2.2.5 连接产物转化第28页
            2.2.6 重组子的PCR鉴定、双酶切鉴定第28页
        2.3 影响根癌农杆菌所介导的HbHMGR1基因遗传转化的因素研究第28-29页
            2.3.1 根癌农杆菌菌液浓度对于橡胶树易碎胚性愈伤组织遗传转化的影响第28页
            2.3.2 根癌农杆菌静置侵染时间对于转化的影响第28-29页
            2.3.3 共培养温度对于橡胶树易碎胚性愈伤组织转化的影响第29页
            2.3.4 共培养天数对于橡胶树易碎胚性愈伤组织转化的影响第29页
            2.3.5 共培养pH对于橡胶树易碎胚性愈伤组织转化的影响第29页
            2.3.6 硫酸卡那霉素、替卡西林浓度对于橡胶树易碎胚性愈伤组织转化的影响第29页
        2.4 抗性愈伤组织的筛选第29-30页
        2.5 抗性胚状体的诱导及其植株再生第30页
        2.6 转化材料的GUS组织化学染色第30页
        2.7 橡胶树易碎胚性愈伤组织细胞活性的测定第30-31页
        2.8 试验数据统计与分析第31页
        2.9 对拟转化橡胶树植株的抗性愈伤进行分子检测第31-33页
            2.9.1 对拟转化橡胶树植株的抗性愈伤材料DNA提取第31页
            2.9.2 检测引物的设计第31-32页
            2.9.3 拟转化材料愈伤uidA基因、nptⅡ基因的PCR检测第32页
            2.9.4 拟转化材料RNA的提取、cDNA的制备第32-33页
        2.10 DNA杂交(Southern blotting)第33-35页
            2.10.1 橡胶树DNA基因组酶切第33页
            2.10.2 DNA的印记转移第33-34页
            2.10.3 尼龙膜的固定第34页
            2.10.4 探针的制备第34页
            2.10.5 杂交第34-35页
第三章 结果与分析第35-54页
    1 植物表达载体pCAMBIA 2301-35S-HbHMGR1的构建第35-38页
        1.1 橡胶树胶乳总RNA的提取、目的基因的测序和序列分析第35-37页
        1.2 载体pMD19-T-HbHMGR1、pCAMBIA2301-MCS载体的双酶切第37页
        1.3 植物表达载体pCAMBIA2301-35S-HbHMGR1的鉴定第37-38页
    2 抗生素对橡胶树热研8-79易碎胚性愈伤组织的影响第38-40页
        2.1 替卡西林对农杆菌、易碎胚性愈伤组织的影响第38-39页
        2.2 硫酸卡那霉素对橡胶树易碎胚性愈伤组织的影响第39-40页
    3 不同的处理方式对于橡胶树热研8-79易碎胚性愈伤组织转化的影响第40-43页
        3.1 根癌农杆菌菌液浓度对于转化的影响第40页
        3.2 侵染时间对于转化的影响第40-41页
        3.3 共培养时间对橡胶转化的影响第41-42页
        3.4 共培养温度对于橡胶转化的影响第42页
        3.5 共培养pH对橡胶转化的影响第42-43页
    4 橡胶树热研8-79抗性易碎胚性愈伤组织的继代筛选第43-45页
    5 抗性易碎胚性愈伤组织的胚状体诱导及其植株再生第45-46页
    6 胚状体及其转化植株的GUS染色情况第46-47页
    7 橡胶树热研8-79抗性易碎胚性愈伤组织的分子检测第47-52页
        7.1 抗性易碎胚性愈伤组织的DNA提取第47-48页
        7.2 抗性易碎胚性愈伤组织的PCR检测第48-49页
        7.3 抗性易碎胚性愈伤组织RNA的提取,及其HbHMGR1基因的RT-PCR第49-51页
        7.4 抗性材料的Southern blotting实验第51-52页
    1 转化条件对橡胶树易碎胚性愈伤组织的影响第52页
        1.1 转化所用外植体的选择第52页
        1.2 培养条件对外植体的影响第52页
    2 转化条件对于转化效果的影响第52-53页
    3 转化过程对于材料的影响第53页
    4 HMGR基因转化对于植株的影响第53-54页
第五章 结论第54-55页
参考文献第55-60页
附表1第60-61页
附表2第61-62页
致谢第62页

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