| 摘要 | 第6-8页 |
| Abstract | 第8-9页 |
| 文献综述 | 第10-23页 |
| 1 昆虫的免疫防御 | 第10页 |
| 2 蛋白酶抑制因子 | 第10-14页 |
| 2.1 丝氨酸蛋白酶抑制因子(serine protease inhibitors,Serpins) | 第11页 |
| 2.2 Serpins的结构与功能 | 第11-12页 |
| 2.3 国内外有关昆虫体内Serpin的研究进展 | 第12-14页 |
| 3 模式识别蛋白 | 第14-17页 |
| 3.1 β-1,3葡聚糖识别蛋白(β-1,3-glucan recognition protein,βGRP) | 第14-16页 |
| 3.2 βGRP的结构与功能 | 第16页 |
| 3.3 国内外有关昆虫体内βGRP的研究进展 | 第16-17页 |
| 4 研究目的和意义 | 第17-18页 |
| 5 参考文献 | 第18-23页 |
| 第一章 亚洲玉米螟丝氨酸蛋白酶抑制因子Serpin2的克隆及表达分析 | 第23-55页 |
| 1 前言 | 第23页 |
| 2 材料与方法 | 第23-37页 |
| 2.1 供试昆虫 | 第23-24页 |
| 2.2 主要试剂 | 第24页 |
| 2.3 主要仪器 | 第24-25页 |
| 2.4 总RNA提取 | 第25页 |
| 2.5 亚洲玉米螟幼虫Of-Serpin2基因3'-RACE | 第25-29页 |
| 2.5.1 3'cDNA第一链的合成 | 第25页 |
| 2.5.2 引物设计与合成 | 第25-26页 |
| 2.5.3 操作步骤 | 第26-28页 |
| 2.5.4 目的基因片段的回收纯化 | 第28页 |
| 2.5.5 目的片段与克隆载体连接 | 第28-29页 |
| 2.5.6 连接载体转化 | 第29页 |
| 2.5.7 单菌落PCR检测 | 第29页 |
| 2.5.8 测序 | 第29页 |
| 2.6 Of-Serpin2基因的5'-RACE | 第29-31页 |
| 2.6.1 5'cDNA的合成 | 第29-30页 |
| 2.6.2 SMARTer~(?)RACE 5'/3'Kit反应原理和引物设计 | 第30-31页 |
| 2.6.3 操作步骤 | 第31页 |
| 2.6.4 5'-RACE产物的克隆测序 | 第31页 |
| 2.7 序列的生物信息学分析 | 第31-33页 |
| 2.7.1 数据库搜索及亚洲玉米螟Of-Serpin2基因编码蛋白的理化性质分析 | 第32页 |
| 2.7.2 亚洲玉米螟Serpin2基因编码蛋白的结构和功能分析 | 第32-33页 |
| 2.7.3 基于昆虫Of-Serpin2核苷酸序列推导的氨基酸序列的系统进化树构建 | 第33页 |
| 2.8 Of-Serpin2蛋白的原核表达 | 第33-37页 |
| 2.8.1 表达质粒pET-28a-Of-Serpin2的构建 | 第33-35页 |
| 2.8.2 重组表达 | 第35-36页 |
| 2.8.3 表达蛋白的Western blotting鉴定 | 第36-37页 |
| 3 结果与分析 | 第37-51页 |
| 3.1 Of-Serpin2基因cDNA全长序列 | 第37-39页 |
| 3.1.1 Of-Serpin2基因全长cDNA序列的3'-RACE和5'-RACE | 第37-39页 |
| 3.1.2 Of-Serpin2基因全长cDNA序列的克隆 | 第39页 |
| 3.2 Of-Serpin2基因的生物信息学分析 | 第39-47页 |
| 3.2.1 Of-Serpin2基因的核苷酸序列和氨基酸序列 | 第39-41页 |
| 3.2.2 Of-Serpin2基因核苷酸序列和氨基酸序列的BlastP分析 | 第41-43页 |
| 3.2.3 Of-Serpin2基因的系统进化树 | 第43-44页 |
| 3.2.4 Of-Serpin2基因信号肽、跨膜结构、翻译后修饰以及疏水性分析 | 第44-47页 |
| 3.2.5 Of-Serpin2基因的三维结构及功能结构域分析 | 第47页 |
| 3.3 Of-Serpin2基因的原核表达 | 第47-51页 |
| 3.3.1 Of-Serpin2基因表达载体的构建 | 第47-49页 |
| 3.3.2 pET-28a-Of-Serpin2原核表达条件的筛选 | 第49-51页 |
| 4 讨论 | 第51-55页 |
| 第二章 亚洲玉米螟幼虫体内βGRP3基因RNA干扰研究 | 第55-78页 |
| 1 前言 | 第55-56页 |
| 2 材料与方法 | 第56-62页 |
| 2.1 供试昆虫 | 第56页 |
| 2.2 主要试剂 | 第56-57页 |
| 2.3 主要仪器 | 第57页 |
| 2.4 亚洲玉米螟幼虫βGRP3基因的RNA干扰及免疫相关基因的表达水平分析 | 第57-61页 |
| 2.4.1 RNAi引物设计 | 第57-58页 |
| 2.4.2 dsRNA的制备 | 第58-59页 |
| 2.4.3 亚洲玉米螟幼虫dsRNA的注射及取样 | 第59页 |
| 2.4.4 Real time PCR检测 | 第59-61页 |
| 2.5 βGRP3基因RNA干扰效率评估及亚洲玉米螟幼虫的抗菌能力分析 | 第61页 |
| 2.6 βGRP3基因RNA干扰后亚洲玉米螟幼虫体内血细胞的计数 | 第61页 |
| 2.7 βGRP3基因RNA干扰后亚洲玉米螟幼虫血淋巴中PO活性测定 | 第61页 |
| 2.8 数据分析 | 第61-62页 |
| 3 结果与分析 | 第62-70页 |
| 3.1 dsRNA合成纯度分析 | 第62-63页 |
| 3.2 亚洲玉米螟血细胞中βGRP3基因RNA干扰后表达水平分析 | 第63页 |
| 3.3 亚洲玉米螟幼虫βGRP3基因RNA干扰后再次注射细菌的存活率变化 | 第63-64页 |
| 3.4 亚洲玉米螟幼虫βGRP3基因RNA干扰后幼虫体内免疫相关基因表达分析 | 第64-66页 |
| 3.5 亚洲玉米螟幼虫βGRP3基因RNA干扰后血淋巴中PO活性检测 | 第66-67页 |
| 3.6 亚洲玉米螟幼虫βGRP3基因RNA干扰后血淋巴中细胞数量的变化 | 第67-70页 |
| 4 讨论 | 第70-71页 |
| 5 参考文献 | 第71-78页 |
| 致谢 | 第78-79页 |
| 攻读硕士学位期间发表的学术论文 | 第79-80页 |
