| 摘要 | 第1-8页 |
| ABSTRACT | 第8-16页 |
| 第一部分 文献综述 | 第16-50页 |
| 第一章 动物 micoRNA 的基本生物学特征 | 第16-29页 |
| ·miRNA 的发现、判定与命名 | 第16-18页 |
| ·miRNA 的发现 | 第16-17页 |
| ·miRNA 的判定 | 第17页 |
| ·miRNA 的命名 | 第17-18页 |
| ·动物miRNA 的生物学加工和表达调控 | 第18-21页 |
| ·动物miRNA 的生物学加工 | 第18-20页 |
| ·动物miRNA 的表达调控 | 第20-21页 |
| ·miRNA 调控动物基因表达的机制 | 第21-24页 |
| ·miRNA 的翻译起始抑制 | 第21-22页 |
| ·miRNA 的翻译起始后抑制 | 第22-23页 |
| ·miRNA 介导mRNA 降解 | 第23页 |
| ·胞质颗粒的扣押 | 第23-24页 |
| ·miRNA 与siRNA 的区别 | 第24-25页 |
| ·miRNA 在动物生长发育中的功能 | 第25-29页 |
| ·miRNA 调控动物的发育时序 | 第25-26页 |
| ·miRNA 调控动物的胚胎发生 | 第26-27页 |
| ·miRNA 调控动物分化和器官形成 | 第27-28页 |
| ·动物miRNA 与生长调控和细胞编程性死亡 | 第28-29页 |
| 第二章 miRNA 调控动物脂肪细胞分化和脂类代谢 | 第29-43页 |
| ·miRNA 调控动物脂肪细胞分化 | 第29-32页 |
| ·动物脂肪细胞分化过程受许多miRNAs 的调控 | 第29-30页 |
| ·miRNA 促进动物体外培养脂肪细胞的分化 | 第30-31页 |
| ·miRNA 调控动物脂肪细胞分化的机理 | 第31-32页 |
| ·脂肪组织miRNA 和能量代谢调控 | 第32-33页 |
| ·肝脏miRNA 和脂类代谢调控 | 第33-34页 |
| ·miRNA 调控脂类代谢相关激素——胰岛素的分泌 | 第34-36页 |
| ·miRNA 调节胰脏及其β-细胞的发育 | 第34-35页 |
| ·miRNA 调节胰岛素的分泌释放 | 第35页 |
| ·miRNA 调节胰岛素信号通路 | 第35-36页 |
| ·miR-103 的研究进展 | 第36-43页 |
| ·动物miR-103 的进化特征 | 第36-38页 |
| ·动物间miR-103 的表达特征 | 第38页 |
| ·miR-103 的功能 | 第38-43页 |
| ·miR-103 参与脂肪形成和代谢 | 第39-41页 |
| ·miR-103 参与血细胞生成 | 第41页 |
| ·miR-103 参与癌症发生 | 第41-43页 |
| 第三章 猪miRNA 的研究进展 | 第43-50页 |
| ·miRNA 在家畜生产中的研究与应用 | 第43-45页 |
| ·猪miRNA 的研究进展 | 第45-50页 |
| ·猪miRNA 的筛选鉴定 | 第45-46页 |
| ·猪miRNA 的表达谱 | 第46-50页 |
| 第二部分 猪脂肪组织发育相关miRNA 的鉴定、特征和表达分析 | 第50-96页 |
| 第四章 猪脂肪组织小RNA 文库的构建和Solexa 测序 | 第52-65页 |
| ·材料与方法 | 第52-57页 |
| ·所用试剂和仪器 | 第52页 |
| ·动物样品采集和总 RNA 提取 | 第52-53页 |
| ·猪脂肪组织小 RNA 文库的构建 | 第53-56页 |
| ·总 RNA 的 Agilent 2100 分析 | 第53页 |
| ·小 RNA cDNA 文库的构建 | 第53-56页 |
| ·小 RNA cDNA 文库的 Agilent 2100 检测和 QPCR 分析 | 第56页 |
| ·小 RNA 文库的 Solexa 测序 | 第56页 |
| ·小 RNA 序列分析 | 第56-57页 |
| ·序列的初级分析 | 第56页 |
| ·小 RNA 序列的基因组比对 | 第56页 |
| ·重复序列比对 | 第56页 |
| ·Genbank 比对、Rfam 比对、内含子和外显子比对 | 第56-57页 |
| ·小 RNA 分类注释 | 第57页 |
| ·结果 | 第57-63页 |
| ·总 RNA 样品检测结果 | 第57-58页 |
| ·文库质量检测 | 第58页 |
| ·文库小 RNA 的序列读数及其分布和基因组定位 | 第58-62页 |
| ·小 RNA 序列的分类注释 | 第62-63页 |
| ·讨论 | 第63-65页 |
| 第五章 猪脂肪组织发育相关miRNA 的鉴定和特征 | 第65-85页 |
| ·材料与方法 | 第65-66页 |
| ·猪保守miRNA 的鉴定 | 第65页 |
| ·猪新的候选miRNA 的鉴定 | 第65-66页 |
| ·猪保守miRNA“种子”区序列的碱基编辑 | 第66页 |
| ·结果 | 第66-84页 |
| ·猪保守miRNA 的鉴定 | 第66-71页 |
| ·猪保守miRNA 前体二级结构预测及其序列聚类 | 第71-77页 |
| ·猪保守miRNA 序列变异和“种子”区序列的碱基编辑 | 第77-81页 |
| ·猪新的候选miRNA 鉴定 | 第81-84页 |
| ·讨论 | 第84-85页 |
| 第六章 猪脂肪组织发育相关miRNA 的表达分析和功能预测 | 第85-96页 |
| ·材料与方法 | 第85-86页 |
| ·miRNA 的茎-环定量RT-PCR | 第85-86页 |
| ·差异表达分析 | 第86页 |
| ·miRNA 靶基因预测、KEGG 通路分析和GO term 富集 | 第86页 |
| ·结果 | 第86-94页 |
| ·猪脂肪组织发育过程已知miRNA 的表达分析 | 第86-87页 |
| ·高丰度miRNA 的茎-环定量 RT-PCR | 第87-90页 |
| ·miRNA 靶基因预测、KEGG 通路分析和 GO term 富集分析 | 第90-94页 |
| ·讨论 | 第94-96页 |
| ·miRNA 表达谱反映了它们在猪脂肪组织发育过程中的作用 | 第94-95页 |
| ·靶基因分析初步揭示了猪脂肪组织高丰度表达miRNA 的潜在生物学功能 | 第95-96页 |
| 第三部分 猪miR-103 生物学功能的初步研究 | 第96-131页 |
| 第七章 猪miR-103 的组织表达谱研究 | 第97-106页 |
| ·材料与方法 | 第97-99页 |
| ·样品采集和总 RNA 提取 | 第97页 |
| ·反转录反应 | 第97页 |
| ·实时定量 PCR | 第97-98页 |
| ·标准曲线制定 | 第98页 |
| ·猪组织中miR-103 表达量的计算 | 第98页 |
| ·统计分析 | 第98-99页 |
| ·结果 | 第99-104页 |
| ·miR-103 实时定量PCR 检测的特异性和U6 snRNA 作为内参的稳定性 | 第99-100页 |
| ·miR-103 和U6 snRNA 的标准曲线 | 第100-101页 |
| ·miR-103 在猪正常组织中的时序表达 | 第101-102页 |
| ·miR-103 在猪同种组织不同解剖部位间的表达分析 | 第102-103页 |
| ·miR-103 在猪不同个体间的表达 | 第103-104页 |
| ·讨论 | 第104-106页 |
| 第八章 基于靶基因和组织表达谱分析的miR-103 生物学功能 | 第106-115页 |
| ·方法 | 第106-107页 |
| ·miR-103 靶基因预测 | 第106页 |
| ·靶基因的 GO 注释和 GO Terms 富集 | 第106-107页 |
| ·结果 | 第107-108页 |
| ·miR-103 与神经系统发育 | 第107-108页 |
| ·miR-103 与脂类代谢和脂肪细胞分化 | 第108页 |
| ·miR-103 与免疫和红细胞生成调节 | 第108页 |
| ·讨论 | 第108-115页 |
| 第九章 miR-103 促进猪前体脂肪细胞分化 | 第115-124页 |
| ·材料与方法 | 第115-117页 |
| ·试验动物 | 第115页 |
| ·猪前体脂肪细胞的分离和培养 | 第115-116页 |
| ·miR-103 的反义抑制和转染 | 第116页 |
| ·油红 O 染色 | 第116页 |
| ·实时定量 RT-PCR 分析 | 第116-117页 |
| ·Western blotting 分析 | 第117页 |
| ·甘油三酯含量的测定 | 第117页 |
| ·统计分析 | 第117页 |
| ·结果 | 第117-122页 |
| ·miR-103 在猪前体脂肪细胞分化过程被上调表达 | 第117-118页 |
| ·miR-103 的反义抑制降低了它在猪前体脂肪细胞分化早期的表达水平 | 第118-119页 |
| ·miR-103 的反义抑制降低了猪前体脂肪细胞的早期分化比例 | 第119-120页 |
| ·miR-103 可能通过潜在靶基因 RAI14 调节猪前体脂肪细胞分化 | 第120-122页 |
| ·讨论 | 第122-124页 |
| 第十章 猪正常组织miR-103 实时定量PCR 分析适宜内参确定 | 第124-131页 |
| ·材料与方法 | 第124-125页 |
| ·样品采集和总 RNA 提取 | 第124页 |
| ·反转录反应 | 第124页 |
| ·实时定量 PCR | 第124页 |
| ·选择内参和扩增效率验证 | 第124-125页 |
| ·miR-103 的相对定量和绝对定量分析 | 第125页 |
| ·结果 | 第125-129页 |
| ·候选内参基因表达稳定性比较 | 第125页 |
| ·miR-196、U6 snRNA 与miR-103 的扩增效率 | 第125-127页 |
| ·应用内参对miR-103 实时定量 PCR 数据校正结果的比较 | 第127-129页 |
| ·讨论 | 第129-131页 |
| ·miRNA 实时定量PCR 数据分析与内参对照的选择 | 第129页 |
| ·miR-103 的组织表达与功能 | 第129-131页 |
| 结论 | 第131-132页 |
| 创新点 | 第132-133页 |
| 进一步的研究内容 | 第133-134页 |
| 参考文献 | 第134-151页 |
| 缩略词表 | 第151-152页 |
| 致谢 | 第152-153页 |
| 作者简介 | 第153页 |
