| 摘要 | 第3-5页 |
| Abstract | 第5-6页 |
| 缩略语表 | 第7-11页 |
| 第1章 引言 | 第11-22页 |
| 1.1 尼罗罗非鱼研究现状 | 第11页 |
| 1.2 鱼类性别决定与性别分化 | 第11-17页 |
| 1.2.1 鱼类的性染色体类型 | 第12页 |
| 1.2.2 性别决定与分化相关基因研究进展 | 第12-17页 |
| 1.3 环境对鱼类性别的影响 | 第17-19页 |
| 1.3.1 温度在鱼类性别决定与分化中的作用 | 第18页 |
| 1.3.2 激素在鱼类性别决定与分化中的作用 | 第18-19页 |
| 1.3.3 其他环境因素在鱼类性别决定与分化中的作用 | 第19页 |
| 1.4 鱼类性逆转研究现状 | 第19-20页 |
| 1.5 罗非鱼卵巢细胞培养 | 第20页 |
| 1.6 热休克蛋白研究进展 | 第20-21页 |
| 1.7 本论文的研究目的和意义 | 第21-22页 |
| 第2章 尼罗罗非鱼 Cyp19a1a 蛋白的表达纯化与多克隆抗体制备 | 第22-45页 |
| 2.1 材料 | 第23-24页 |
| 2.1.1 实验材料 | 第23页 |
| 2.1.2 主要仪器 | 第23页 |
| 2.1.3 实验药品及试剂 | 第23-24页 |
| 2.2 实验方法 | 第24-36页 |
| 2.2.1 尼罗罗非鱼 cyp19a1a 目的片段 cDNA 的克隆 | 第24-29页 |
| 2.2.2 尼罗罗非鱼 pET-28a-cyp19a1a 重组质粒的构建与鉴定 | 第29-30页 |
| 2.2.3 pET-28a-cyp19a1a 重组蛋白的原核表达与鉴定 | 第30-31页 |
| 2.2.4 重组 pET-28a-cyp19a1a 蛋白表达条件优化 | 第31-32页 |
| 2.2.5 表达蛋白的纯化 | 第32-33页 |
| 2.2.6 层析柱的再生 | 第33页 |
| 2.2.7 BCA 法测定蛋白浓度 | 第33-34页 |
| 2.2.8 pET-28a-cyp19a1a 重组蛋白的 Western-blot 检测 | 第34页 |
| 2.2.9 多克隆抗体的制备 | 第34-35页 |
| 2.2.10 鼠抗多克隆抗体的 western-blot 检测 | 第35页 |
| 2.2.11 高温诱导对尼罗罗非鱼卵巢 cyp19a1a 蛋白表达的影响 | 第35-36页 |
| 2.3 实验结果 | 第36-43页 |
| 2.3.1 尼罗罗非鱼卵巢 RNA 的质量检测 | 第36页 |
| 2.3.2 反转录模板的检测 | 第36-37页 |
| 2.3.3 抗原性分析 | 第37页 |
| 2.3.4 pET-28a-cyp19a1a 重组载体构建 | 第37-38页 |
| 2.3.5 融合蛋白的表达与鉴定 | 第38-39页 |
| 2.3.6 不同诱导时间和诱导剂浓度对目的蛋白在大肠杆菌中表达的影响 | 第39-40页 |
| 2.3.7 重组蛋白纯化及 Western-blot 检测 | 第40-41页 |
| 2.3.8 尼罗罗非鱼卵巢全蛋白与多抗的 Western-blot 检测结果 | 第41-42页 |
| 2.3.9 高温诱导对尼罗罗非鱼性腺 cyp19a1a 蛋白表达的影响 | 第42-43页 |
| 2.4 讨论 | 第43-45页 |
| 第3章 尼罗罗非鱼卵巢细胞的建立及高温诱导对 Cyp19a1a 体外表达的影响 | 第45-55页 |
| 3.1 材料 | 第45-47页 |
| 3.1.1 实验材料 | 第45-46页 |
| 3.1.2 主要仪器 | 第46页 |
| 3.1.3 实验药品及试剂 | 第46-47页 |
| 3.2 实验方法 | 第47-49页 |
| 3.2.1 鱼血清的制备 | 第47页 |
| 3.2.2 组织取材 | 第47页 |
| 3.2.3 尼罗罗非鱼卵巢的原代培养和继代培养 | 第47-48页 |
| 3.2.4 高温诱导对罗非鱼卵巢细胞的影响 | 第48页 |
| 3.2.5 总 RNA 提取及 cDNA 合成 | 第48页 |
| 3.2.6 Real Time PCR | 第48-49页 |
| 3.3 实验结果 | 第49-53页 |
| 3.3.1 尼罗罗非鱼卵巢细胞的原代培养 | 第49-50页 |
| 3.3.2 尼罗罗非鱼卵巢细胞传代培养 | 第50页 |
| 3.3.3 高温诱导对罗非鱼卵巢细胞生长的影响 | 第50-51页 |
| 3.3.4 高温诱导对尼罗罗非鱼体内 cyp19a1a 及 Hsp70 基因表达量的影响 | 第51-52页 |
| 3.3.5 高温诱导对尼罗罗非鱼卵巢细胞 cyp19a1a 及 Hsp70 基因表达量的影响 | 第52-53页 |
| 3.4 讨论 | 第53-55页 |
| 第4章 结论与展望 | 第55-57页 |
| 4.1 结论 | 第55-56页 |
| 4.2 展望 | 第56-57页 |
| 参考文献 | 第57-66页 |
| 致谢 | 第66-67页 |
| 攻读硕士期间的研究成果 | 第67页 |
