| 摘要 | 第4-5页 |
| abstract | 第5-6页 |
| 第1章 文献综述 | 第11-23页 |
| 1.1 油菜生产现状 | 第11-12页 |
| 1.2 油菜油酸研究发展动态 | 第12-19页 |
| 1.2.1 植物油脂合成 | 第12-14页 |
| 1.2.2 高油酸油菜育种研究进展 | 第14-15页 |
| 1.2.3 油脂合成途径关键酶基因研究 | 第15-18页 |
| 1.2.3.1 中长链脂肪酸合成的关键基因 | 第15-16页 |
| 1.2.3.2 TAG生物合成 | 第16-18页 |
| 1.2.4 油脂合成相关转录因子研究 | 第18-19页 |
| 1.3 WRI1基因的研究进展 | 第19-21页 |
| 1.3.1 WRI1基因的分离 | 第19-20页 |
| 1.3.2 WRI1基因的结构与功能 | 第20页 |
| 1.3.3 WRI1基因的表达调控研究 | 第20-21页 |
| 1.4 本研究目的与意义 | 第21-23页 |
| 第2章 甘蓝型油菜WRI1基因的克隆与序列分析 | 第23-32页 |
| 2.1 材料与方法 | 第23-27页 |
| 2.1.1 供试材料 | 第23页 |
| 2.1.2 主要试剂及器具 | 第23页 |
| 2.1.3 反转录获得第一链 c DNA | 第23-24页 |
| 2.1.4 引物设计与PCR高保真扩增 | 第24页 |
| 2.1.5 PCR产物纯化回收与载体pMD19-T连接 | 第24-25页 |
| 2.1.6 大肠杆菌感受态的制备 | 第25-26页 |
| 2.1.7 大肠杆菌转化 | 第26页 |
| 2.1.8 PCR检测与测序 | 第26-27页 |
| 2.1.9 BnaWRI1基因生物信息学分析 | 第27页 |
| 2.2 结果与分析 | 第27-32页 |
| 2.2.1 总RNA的提取 | 第27-28页 |
| 2.2.2 WRI1基因mRNA全长编码序列的克隆及菌落PCR检测 | 第28页 |
| 2.2.3 WRI1基因测序结果分析 | 第28-30页 |
| 2.2.4 WRI1基因生物信息学分析 | 第30-32页 |
| 第3章 甘蓝型油菜WRI1基因功能的初步表达分析 | 第32-48页 |
| 3.1 酵母真核表达分析 | 第32-40页 |
| 3.1.1 材料 | 第32-34页 |
| 3.1.1.1 菌种及载体 | 第32页 |
| 3.1.1.2 化学试剂及实验器具 | 第32页 |
| 3.1.1.3 培养基及相关工作液配制 | 第32-34页 |
| 3.1.2 实验方法 | 第34-37页 |
| 3.1.2.1 酿酒酵母真核表达载体的构建 | 第34-35页 |
| 3.1.2.2 酿酒酵母感受态细胞的制备 | 第35页 |
| 3.1.2.3 酿酒酵母细胞的转化 | 第35-36页 |
| 3.1.2.4 缺陷型酿酒酵母转化子的诱导表达 | 第36页 |
| 3.1.2.5 酵母真核表达 | 第36-37页 |
| 3.1.3 结果与分析 | 第37-40页 |
| 3.1.3.1 真核表达载体的构建 | 第37-38页 |
| 3.1.3.2 BnaWRI1基因在酵母中的表达检测 | 第38-40页 |
| 3.2 RT-qPCR检测油脂合成中相关转录因子的时间表达变化 | 第40-48页 |
| 3.2.1 材料与方法 | 第40-43页 |
| 3.2.1.1 供试材料 | 第40页 |
| 3.2.1.2 主要试剂及仪器 | 第40页 |
| 3.2.1.3 总RNA的提取与反转录合成第一链cDNA | 第40-41页 |
| 3.2.1.4 荧光定量PCR引物设计与筛选 | 第41-42页 |
| 3.2.1.5 样品的荧光定量PCR检测 | 第42-43页 |
| 3.2.2 结果与分析 | 第43-48页 |
| 3.2.2.1 荧光定量引物的筛选 | 第43-44页 |
| 3.2.2.2 WRI1基因在种子不同时期荧光定量的表达分析 | 第44-48页 |
| 第4章 甘蓝型油菜WRI1基因植物表达载体的构建与拟南芥的遗传转化 | 第48-55页 |
| 4.1 材料 | 第48-49页 |
| 4.1.1 实验材料 | 第48页 |
| 4.1.2 仪器设备 | 第48页 |
| 4.1.3 主要试剂及相关工作液、培养基配制 | 第48-49页 |
| 4.1.3.1 溶液配制 | 第48页 |
| 4.1.3.2 培养基配制 | 第48-49页 |
| 4.2 实验方法 | 第49-52页 |
| 4.2.1 植物表达载体的构建 | 第49-50页 |
| 4.2.2 农杆菌感受态的制备 | 第50-51页 |
| 4.2.3 农杆菌转化 | 第51页 |
| 4.2.4 拟南芥的种植 | 第51-52页 |
| 4.2.4.1 种子春化 | 第51页 |
| 4.2.4.2 人工土配制 | 第51页 |
| 4.2.4.3 播种 | 第51页 |
| 4.2.4.4 水分保持 | 第51页 |
| 4.2.4.5 转化适期 | 第51页 |
| 4.2.4.6 农杆菌的扩大培养 | 第51-52页 |
| 4.2.5 拟南芥的遗传转化 | 第52页 |
| 4.2.6 转基因拟南芥的鉴定 | 第52页 |
| 4.3 结果与分析 | 第52-55页 |
| 4.3.1 种子特异性表达载体的构建 | 第52-53页 |
| 4.3.2 拟南芥抗性苗的筛选 | 第53-55页 |
| 第五章 讨论 | 第55-57页 |
| 5.1 甘蓝型油菜WRI1基因生物信息学分析 | 第55页 |
| 5.2 甘蓝型油菜WRI1基因与油酸合成途径中重要基因关系 | 第55-56页 |
| 5.3 结论 | 第56-57页 |
| 参考文献 | 第57-67页 |
| 致谢 | 第67-68页 |
| 作者简介 | 第68页 |
