| 摘要 | 第1-3页 |
| Abstract | 第3-7页 |
| 引言 | 第7-9页 |
| 第一章 实验材料 | 第9-11页 |
| ·主要试剂与材料 | 第9页 |
| ·主要仪器与设备 | 第9-10页 |
| ·主要液体的配制 | 第10-11页 |
| 第二章 实验方法 | 第11-19页 |
| ·RPMI-1640培养基的配制 | 第11页 |
| ·细胞培养 | 第11页 |
| ·shRNA设计和合成 | 第11页 |
| ·表达质粒的构建 | 第11-14页 |
| ·寡核苷酸链退火 | 第11-12页 |
| ·质粒连接 | 第12页 |
| ·感受态大肠杆菌DH5α的转化及筛选 | 第12-13页 |
| ·质粒的小量提取 | 第13页 |
| ·重组质粒酶切鉴定 | 第13-14页 |
| ·DNA测序 | 第14页 |
| ·提取并纯化质粒 | 第14页 |
| ·细胞转染 | 第14-15页 |
| ·细胞分组方案 | 第14页 |
| ·细胞准备 | 第14-15页 |
| ·转染液体制备 | 第15页 |
| ·转染 | 第15页 |
| ·半定量RT-PCR检测细胞内EGFR mRNA转录水平的变化 | 第15-17页 |
| ·Trizol一步法提取细胞总RNA | 第15-16页 |
| ·逆转录反应 | 第16页 |
| ·PCR扩增和检测 | 第16-17页 |
| ·免疫细胞化学(ICC)检测细胞EGFR蛋白的表达 | 第17页 |
| ·流式细胞技术(FCM)检测细胞周期和凋亡 | 第17-18页 |
| ·统计学分析 | 第18-19页 |
| 第三章 实验结果 | 第19-23页 |
| ·pEGFR-shRNA质粒的测序结果 | 第19页 |
| ·pEGFR-shRNA对SKOV3/DDP细胞EGFR mRNA表达的影响 | 第19-20页 |
| ·pEGFR-shRNA对细胞EGFR蛋白表达的影响 | 第20-21页 |
| ·pEGFR-shRNA对SKOV3/DDP周期和凋亡的影响 | 第21-23页 |
| 讨论 | 第23-26页 |
| 参考文献 | 第26-28页 |
| 综述 | 第28-35页 |
| 参考文献 | 第35-38页 |
| 攻读学位期间的研究成果 | 第38-39页 |
| 致谢 | 第39-40页 |
