| 摘要 | 第3-5页 |
| ABSTRACT | 第5-6页 |
| 1 研究背景和文献综述 | 第10-22页 |
| 1.1 斑马鱼心脏发育概述 | 第10-15页 |
| 1.1.1 斑马鱼模型的选择 | 第10-11页 |
| 1.1.2 斑马鱼心脏发育过程及研究现状 | 第11-15页 |
| 1.2 蛋白质二硫键异构酶(PDIs)家族 | 第15-20页 |
| 1.2.1 含ZF-CXXC结构域的蛋白质与CpG岛的关系 | 第17-19页 |
| 1.2.2 CXXC家族基因与信号通路之间的关系 | 第19-20页 |
| 1.3 本文研究意义 | 第20-22页 |
| 2 材料和方法 | 第22-36页 |
| 2.1 材料 | 第22-26页 |
| 2.1.1 酶类、抗体和试剂盒 | 第22-23页 |
| 2.1.2 细胞系、菌株和质粒 | 第23页 |
| 2.1.3 其它试剂 | 第23-24页 |
| 2.1.4 缓冲液和培养基 | 第24-25页 |
| 2.1.5 主要实验仪器和耗材 | 第25页 |
| 2.1.6 生物信息学软件及数据库 | 第25-26页 |
| 2.2 方法 | 第26-36页 |
| 2.2.1 PCR | 第26页 |
| 2.2.2 琼脂糖凝胶电泳检测 | 第26-27页 |
| 2.2.3 质粒的酶切鉴定 | 第27页 |
| 2.2.4 酶切产物与载体的连接 | 第27页 |
| 2.2.5 E.coliTOP10感受态细胞的制备 | 第27-28页 |
| 2.2.6 连接子的转化 | 第28页 |
| 2.2.7 阳性转化子的筛选和鉴定 | 第28页 |
| 2.2.8 融合蛋白的表达 | 第28页 |
| 2.2.9 考马斯亮蓝染色分析 | 第28页 |
| 2.2.10 CFL抗原的大量制备及纯化 | 第28-31页 |
| 2.2.11 CFL多抗血清的制备 | 第31页 |
| 2.2.12 抗体效价检测 | 第31页 |
| 2.2.13 mRNA的转录合成 | 第31-32页 |
| 2.2.14 蛋白的提取 | 第32页 |
| 2.2.15 免疫共沉淀 | 第32-33页 |
| 2.2.16 Western-blot | 第33页 |
| 2.2.17 斑马鱼Morpholino的处理及显微注射 | 第33-34页 |
| 2.2.18 细胞(胚胎)免疫荧光标记 | 第34页 |
| 2.2.19 视黄酸/DEAB处理胚胎 | 第34页 |
| 2.2.20 胚胎原位杂交 | 第34-36页 |
| 3 实验结果及其分析 | 第36-56页 |
| 3.1 斑马鱼CFL基因生物信息学分析 | 第36-41页 |
| 3.1.1 CFL基因的进化树分析 | 第36-37页 |
| 3.1.2 CFL蛋白结构域分析 | 第37-40页 |
| 3.1.3 CFL基因的CpG岛分析 | 第40-41页 |
| 3.2 CFL多克隆抗体的制备及分析 | 第41-51页 |
| 3.2.1 CFL基因的克隆及pMD-18T-CFL重组质粒的构建 | 第41-43页 |
| 3.2.2 pET-28a-CFL融合表达质粒的构建 | 第43-45页 |
| 3.2.3 融合蛋白的诱导表达及纯化 | 第45-46页 |
| 3.2.4 CFL多克隆抗体的制备及效价检测 | 第46-47页 |
| 3.2.5 Western blot实验分析CFL的表达情况 | 第47-48页 |
| 3.2.6 Western blot实验分析CFL在斑马鱼各组织中的表达 | 第48-49页 |
| 3.2.7 CFL在斑马鱼体内的表达情况 | 第49页 |
| 3.2.8 CFL Morpholino的有效性检测 | 第49-50页 |
| 3.2.9 pXT7-CFL质粒的构建 | 第50-51页 |
| 3.3 视黄酸及其抑制剂对CFL表达的影响 | 第51-52页 |
| 3.4 CFL与Dishevelled(DVL2)相互作用研究 | 第52-56页 |
| 3.4.1 pCMV-MYC-CFL质粒的构建 | 第52-53页 |
| 3.4.2 pCMV-tag2B-DVL2质粒的构建 | 第53-54页 |
| 3.4.3 CFL与DVL2的CO-IP | 第54-55页 |
| 3.4.4 CFL与DVL2的亚细胞共定位 | 第55-56页 |
| 4 讨论 | 第56-60页 |
| 4.1 CFL基因的克隆及抗体的制备 | 第56页 |
| 4.2 CFL基因与心脏发育的关系 | 第56-57页 |
| 4.3 CFL基因可能参与RA信号及Wnt信号之间的cross-talk | 第57-58页 |
| 4.4 CFL基因的研究有助于明确zf-CXXC的功能 | 第58-60页 |
| 结语 | 第60-61页 |
| 参考文献 | 第61-70页 |
| 附录1 | 第70-71页 |
| 附录2 | 第71-72页 |
| 致谢 | 第72-74页 |
