| 中文摘要 | 第12-17页 |
| ABSTRACT | 第17-22页 |
| 缩略符号说明 | 第23-26页 |
| 第一章 绪论 | 第26-64页 |
| 1. 质谱在低分子肝素结构表征方面的应用 | 第26-46页 |
| 1.1 低分子肝素的结构和功能 | 第27-30页 |
| 1.2 低分子肝素仿制药的发展 | 第30-31页 |
| 1.3 评价低分子肝素仿制药的准则 | 第31-32页 |
| 1.4 低分子肝素结构表征 | 第32-46页 |
| 1.4.1 质谱分析GAGs的离子化形式 | 第33-34页 |
| 1.4.2 ESI-MS质谱法在LMWHs结构表征中的应用 | 第34-46页 |
| 1.4.2.1 LMWHs完整糖链分析 | 第35-38页 |
| 1.4.2.2 LMWHs寡糖片段分布 | 第38-39页 |
| 1.4.2.3 LMWHs二糖组成分析 | 第39-41页 |
| 1.4.2.4 LMWHs寡糖序列表征 | 第41-46页 |
| 2. 化学酶方法合成硫酸乙酰肝素寡糖 | 第46-62页 |
| 2.1 HS的生物合成机制 | 第48-51页 |
| 2.2 聚合作用 | 第51-52页 |
| 2.3 N-去乙酰化/N-磺酸基转移作用 | 第52-53页 |
| 2.4 己糖醛酸C5异构化作用和2-O-硫酸化作用 | 第53-54页 |
| 2.5 6-O-硫酸化作用 | 第54页 |
| 2.6 3-O-硫酸化作用 | 第54-62页 |
| 3. 论文大纲 | 第62-64页 |
| 第二章 离线HPLC结合ESI-MS/MS序列表征达肝素钠较短寡糖库 | 第64-86页 |
| 1.1 引言 | 第64-65页 |
| 1.2 实验材料 | 第65-66页 |
| 1.2.1 试剂与耗材 | 第65页 |
| 1.2.2 主要仪器 | 第65页 |
| 1.2.3 色谱柱 | 第65-66页 |
| 1.3 实验方法 | 第66-67页 |
| 1.3.1 SEC分离 | 第66页 |
| 1.3.2 SAX分离 | 第66页 |
| 1.3.3 ESI-MS和MS/MS分析 | 第66-67页 |
| 1.3.4 应用python 2.7软件进行序列解析 | 第67页 |
| 1.3.5 肝素酶降解和LC-MS/MS分析 | 第67页 |
| 1.4 结果与讨论 | 第67-84页 |
| 1.4.1 SEC分离达肝素钠较短寡糖 | 第67-70页 |
| 1.4.2 SAX-HPLC高分离度分离达肝素钠较短寡糖 | 第70-72页 |
| 1.4.3 ESI-MS/MS条件优化 | 第72-75页 |
| 1.4.4 开发计算机辅助的MS/MS解谱软件 | 第75-76页 |
| 1.4.5 达肝素钠较短寡糖序列解析 | 第76-83页 |
| 1.4.6 应用肝素酶降解和LC-MS/MS表征特殊的3-O-硫酸化的HexA结构 | 第83-84页 |
| 1.5 本章小结 | 第84-86页 |
| 第三章 化学酶合成3-O-硫酸化的HS寡糖及结构表征 | 第86-107页 |
| 1.1 引言 | 第86-87页 |
| 1.2 实验材料 | 第87-88页 |
| 1.2.1 试剂与耗材 | 第87页 |
| 1.2.2 主要仪器 | 第87页 |
| 1.2.3 色谱柱 | 第87-88页 |
| 1.3 实验方法 | 第88-92页 |
| 1.3.1 化学酶合成生物酶的表达及纯化 | 第88页 |
| 1.3.2 化学酶合成寡糖1-6 | 第88-90页 |
| 1.3.3 3-OST-1和3-OST-3底物特异性研究 | 第90页 |
| 1.3.4 3-OST-3对不同寡糖底物的动力学分析 | 第90-91页 |
| 1.3.5 Q-Sepharose制备柱纯化合成的寡糖1-6 | 第91页 |
| 1.3.6 HPLC分析化学酶合成的寡糖1-6 | 第91页 |
| 1.3.7 ESI-MS分析合成的寡糖1-6 | 第91页 |
| 1.3.8 合成3-O-[~(34)S]标记的寡糖-1和寡糖-4 | 第91-92页 |
| 1.3.9 ESI-MS/MS表征合成的3-O-[~(34)S]标记的寡糖-1和寡糖-4 | 第92页 |
| 1.3.10 NMR结构确证合成的寡糖1-6 | 第92页 |
| 1.4 结果与讨论 | 第92-106页 |
| 1.4.1 化学酶合成含有GlcNS3S和GlcNS3S6S糖单元的寡糖 | 第92-95页 |
| 1.4.2 合成的寡糖1-6结构和构象表征 | 第95-102页 |
| 1.4.3 探究3-O-硫酸基团对IdoA2S构象的影响 | 第102-106页 |
| 1.5 本章小结 | 第106-107页 |
| 第四章 3-OST-3修饰合成的HS寡糖生物活性的研究 | 第107-117页 |
| 1.1 引言 | 第107页 |
| 1.2 实验材料 | 第107-108页 |
| 1.2.1 试剂与耗材 | 第107-108页 |
| 1.2.2 主要仪器 | 第108页 |
| 1.3 实验方法 | 第108-109页 |
| 1.3.1 3-O-硫酸修饰的寡糖体外抗-FXa活性的测定 | 第108页 |
| 1.3.2 3-O-硫酸修饰的寡糖体内抗-FXa活性的测定 | 第108-109页 |
| 1.3.3 评价用药Lewis大鼠体内寡糖的清除速率 | 第109页 |
| 1.3.4 分子动力学模型建立 | 第109页 |
| 1.3.5 分子动力学模拟 | 第109页 |
| 1.4 结果与讨论 | 第109-115页 |
| 1.4.1 -GlcNS3S6S-IdoA2S-二糖单元是肝素发挥抗凝血活性所必需的 | 第109-111页 |
| 1.4.2 HS寡糖ATⅢ-结合域中的GlcA单元可以由IdoA2S单元替换 | 第111-115页 |
| 1.5 本章小结 | 第115-117页 |
| 全文总结 | 第117-120页 |
| 附录 | 第120-141页 |
| 参考文献 | 第141-159页 |
| 致谢 | 第159-160页 |
| 攻读博士学位期间发表的学术论文及申请的专利 | 第160-161页 |
| 学术论文评阅及答辩情况表 | 第161页 |
