| 摘要 | 第6-8页 |
| ABSTRACT | 第8-10页 |
| 文献综述 | 第15-34页 |
| 第一章 Myostatin 基因的研究进展 | 第15-25页 |
| 1.1 Myostatin 基因的发现 | 第15页 |
| 1.2 Myostatin 的特异性表达 | 第15-16页 |
| 1.3 Myostatin 的生物学功能 | 第16-19页 |
| 1.3.1 Myostatin 抑制肌肉生长发育 | 第16-18页 |
| 1.3.2 Myostatin 对肌肉细胞分化的影响 | 第18页 |
| 1.3.3 Myostatin 对一些疾病的影响 | 第18-19页 |
| 1.4 Myostatin 的作用机制 | 第19-22页 |
| 1.4.1 Myostatin 调控成肌细胞细胞周期的进行 | 第20-22页 |
| 1.4.2 Myostatin 抑制细胞分化的机制 | 第22页 |
| 1.5 Myostatin 与其它基因的相互关系 | 第22-23页 |
| 1.6 Myostatin 畜牧生产上的应用前景 | 第23-25页 |
| 第二章 基因打靶技术研究进展 | 第25-34页 |
| 2.1 基因打靶技术的发展简史 | 第25-26页 |
| 2.2 基因打靶技术的基本环节的研究概述 | 第26-31页 |
| 2.2.1 打靶载体的构建 | 第27-29页 |
| 2.2.2 打靶载体的导入 | 第29页 |
| 2.2.3 同源重组子的筛选 | 第29-30页 |
| 2.2.4 同源重组中靶细胞的鉴定 | 第30-31页 |
| 2.3 基因打靶技术的应用 | 第31-33页 |
| 2.3.1 基因功能和基础理论研究方面的应用 | 第31页 |
| 2.3.2 在病理模型和基因治疗方面 | 第31-32页 |
| 2.3.3 培养优良品种动物 | 第32页 |
| 2.3.4 生物反应器方面 | 第32页 |
| 2.3.5 用于器官移植研究 | 第32-33页 |
| 2.4 体细胞基因打靶技术的研究进展 | 第33-34页 |
| 试验部分 | 第34-84页 |
| 第三章 秦川牛与红安格斯牛myostatin 基因克隆及序列对比分析 | 第34-47页 |
| 3.1 材料及试剂 | 第34-35页 |
| 3.1.1 实验试剂 | 第34页 |
| 3.1.2 主要液体的配制 | 第34-35页 |
| 3.2 实验方法 | 第35-36页 |
| 3.2.1 血液的采集与保存 | 第35页 |
| 3.2.2 血液基因组的提取 | 第35页 |
| 3.2.3 引物设计与合成 | 第35页 |
| 3.2.4 Myostatin 基因的扩增及序列测定 | 第35-36页 |
| 3.3 结果 | 第36-43页 |
| 3.3.1 牛血液基因组提取及电泳鉴定 | 第36页 |
| 3.3.2 分3 段PCR 扩增myostatin 基因 | 第36-37页 |
| 3.3.3 Myostatin 基因各段T-A 克隆后SalⅠ单酶切鉴定 | 第37-38页 |
| 3.3.4 测序结果分析 | 第38-43页 |
| 3.4 讨论 | 第43-44页 |
| 3.5 小结 | 第44-47页 |
| 第四章 秦川牛myostatin 基因启动子和第一内含子克隆及功能研究 | 第47-56页 |
| 4.1 试剂及材料 | 第47-48页 |
| 4.1.1 实验试剂 | 第47-48页 |
| 4.1.2 实验材料 | 第48页 |
| 4.2 实验方法 | 第48-49页 |
| 4.2.1 Myostatin 基因启动子与第一内含子克隆与序列分析 | 第48页 |
| 4.2.2 含有myostatin 基因启动子和第一内含子真核表达载体的构建 | 第48-49页 |
| 4.3 C2C12 细胞培养与转染 | 第49-50页 |
| 4.3.1 细胞培养 | 第49-50页 |
| 4.3.2 细胞转染 | 第50页 |
| 4.3.3 流式细胞仪分析 | 第50页 |
| 4.3.4 RT-PCR | 第50页 |
| 4.4 结果 | 第50-54页 |
| 4.4.1 第一内含子和启动子PCR 扩增电泳检测 | 第50-51页 |
| 4.4.2 第一内含子与启动子序列分析 | 第51-52页 |
| 4.4.3 载体酶切鉴定 | 第52页 |
| 4.4.4 转染细胞 | 第52页 |
| 4.4.5 流式细胞分析结果 | 第52-54页 |
| 4.4.6 RT-PCR 鉴定结果 | 第54页 |
| 4.5 讨论 | 第54-55页 |
| 4.6 小结 | 第55-56页 |
| 第五章 秦川牛胎儿骨骼肌卫星细胞的分离培养及鉴定 | 第56-64页 |
| 5.1 实验材料和试剂 | 第56-57页 |
| 5.1.1 实验动物 | 第56页 |
| 5.1.2 主要试剂 | 第56-57页 |
| 5.2 实验方法 | 第57-59页 |
| 5.2.1 原代细胞的分离与培养 | 第57页 |
| 5.2.2 细胞的纯化 | 第57-58页 |
| 5.2.3 骨骼肌卫星细胞的鉴定 | 第58-59页 |
| 5.2.4 骨骼肌卫星细胞对G418 药物毒性敏感性的检测 | 第59页 |
| 5.3 结果 | 第59-62页 |
| 5.3.1 骨骼肌卫星细胞的形态 | 第59-61页 |
| 5.3.2 三种不同分离方法所得细胞数目及细胞存活率 | 第61页 |
| 5.3.3 卫星细胞的鉴定结果 | 第61-62页 |
| 5.3.4 骨骼肌细胞对G418 药物毒性敏感性的检测结果 | 第62页 |
| 5.4 讨论 | 第62-63页 |
| 5.5 小结 | 第63-64页 |
| 第六章 秦川牛骨骼肌细胞myostatin 基因缺失的研究 | 第64-74页 |
| 6.1 材料和试剂 | 第64-65页 |
| 6.1.1 实验材料 | 第64页 |
| 6.1.2 主要试剂 | 第64-65页 |
| 6.2 实验方法 | 第65-69页 |
| 6.2.1 秦川胎牛骨骼肌卫星细胞分离与培养 | 第65页 |
| 6.2.2 基因打靶同源臂的PCR 扩增 | 第65页 |
| 6.2.3 基因打靶同源臂的连接 | 第65-67页 |
| 6.2.4 细胞转染及筛选 | 第67页 |
| 6.2.5 阳性细胞鉴定 | 第67-69页 |
| 6.3 结果 | 第69-72页 |
| 6.3.1 打靶同臂引物PCR 扩增电泳检测 | 第69-70页 |
| 6.3.2 基因打靶载体的构建及酶切鉴定 | 第70页 |
| 6.3.3 阳性克隆的筛选 | 第70-71页 |
| 6.3.4 阳性细胞PCR 鉴定 | 第71-72页 |
| 6.3.5 阳性细胞southern blot 鉴定 | 第72页 |
| 6.3.6 阳性细胞的Western Blot 检测结果 | 第72页 |
| 6.4 讨论 | 第72-73页 |
| 6.5 小结 | 第73-74页 |
| 第七章 秦川牛胎儿成纤维细胞myostatin 基因缺失及核移植胚胎的制备 | 第74-84页 |
| 7.1 材料及试剂 | 第74页 |
| 7.1.1 秦川牛胎儿及卵巢来源 | 第74页 |
| 7.1.2 试剂仪器 | 第74页 |
| 7.2 方法 | 第74-77页 |
| 7.2.1 成纤维细胞的分离培养 | 第74-75页 |
| 7.2.2 打靶载体的转染、药物筛选及阳性细胞鉴定及细胞周期分析 | 第75页 |
| 7.2.3 卵母细胞的采集 | 第75页 |
| 7.2.4 体外成熟卵母细胞的去核 | 第75页 |
| 7.2.5 阳性供体细胞的准备及注核 | 第75页 |
| 7.2.6 核质复合体的电融合 | 第75页 |
| 7.2.7 核移植胚胎的激活和体外培养 | 第75-76页 |
| 7.2.8 克隆胚基因表达的检测 | 第76页 |
| 7.2.9 克隆胚囊胚内细胞凋亡率的鉴定 | 第76-77页 |
| 7.2.10 统计分析 | 第77页 |
| 7.3 结果 | 第77-82页 |
| 7.3.1 成纤维细胞的培养及阳性细胞的筛选 | 第77-78页 |
| 7.3.2 阳性克隆的鉴定 | 第78-80页 |
| 7.3.3 转基因核移植胚胎体外发育的情况 | 第80页 |
| 7.3.4 克隆胚基因表达的检测 | 第80-82页 |
| 7.3.5 克隆胚囊胚内细胞凋亡率的鉴定 | 第82页 |
| 7.4 讨论 | 第82-83页 |
| 7.5 小结 | 第83-84页 |
| 全文结论 | 第84-85页 |
| 创新之处和进一步研究的课题 | 第85-86页 |
| 参考文献 | 第86-102页 |
| 附录 | 第102-107页 |
| 缩略词 | 第107-108页 |
| 致谢 | 第108-109页 |
| 作者简介 | 第109-110页 |
