摘要 | 第5-6页 |
Abstract | 第6-7页 |
第一部分 SCYL1-BP1蛋白的原核表达及初步分离鉴定 | 第8-40页 |
一、前言 | 第8-9页 |
二、材料与方法 | 第9-23页 |
三、结果 | 第23-34页 |
1. 克隆构建 | 第23-26页 |
2. 蛋白表达 | 第26-34页 |
四、讨论 | 第34-37页 |
五、小结 | 第37-38页 |
参考文献 | 第38-40页 |
第二部分 SCYL1-BP1蛋白的真核表达及初步分离鉴定 | 第40-75页 |
一、前言 | 第40-41页 |
二、材料与方法 | 第41-53页 |
三、结果 | 第53-70页 |
1. 设计合成全长毕赤SCYL1-BP1基因的引物 | 第53-60页 |
2. Overlapping PCR法合成全长毕赤SCYL1-BPl基因 | 第60-62页 |
3. Muts蛋白纠正及变性SDS-PAGE检测 | 第62-63页 |
4. T4 DNA聚合酶处理 | 第63页 |
5. 载体pHBM905A CopⅠ和NotⅠ酶切 | 第63-65页 |
6. 连接转化及阳性克隆的初步筛选 | 第65页 |
7. 煮菌阳性结果进行测序 | 第65页 |
8. 第二轮Overlapping PCR | 第65-67页 |
9. 线性化质粒 | 第67页 |
10. 脱磷酸处理 | 第67-68页 |
11. 酵母电击转化 | 第68页 |
12. 外源基因在毕赤酵母中的摇瓶诱导表达 | 第68-70页 |
四、讨论 | 第70-73页 |
五、小结 | 第73-74页 |
参考文献 | 第74-75页 |
总结 | 第75-76页 |
综述 | 第76-85页 |
参考文献 | 第82-85页 |
致谢 | 第85-86页 |