| 摘要 | 第3-5页 |
| ABSTRACT | 第5-7页 |
| 缩略词表 | 第13-15页 |
| 引言 | 第15-23页 |
| 1、槲皮素心血管保护作用的研究进展 | 第16-18页 |
| 1.1 预防心肌肥厚 | 第16页 |
| 1.2 抗高血压 | 第16页 |
| 1.3 改善内皮功能 | 第16-17页 |
| 1.4 抗血小板聚集 | 第17页 |
| 1.5 抗缺血再灌注损伤 | 第17页 |
| 1.6 抗动脉粥样硬化 | 第17页 |
| 1.7 调血脂 | 第17-18页 |
| 1.8 对抗多种物质所致心脏毒性 | 第18页 |
| 1.9 抗氧化应激损伤 | 第18页 |
| 2、本课题的研究背景、研究内容、研究目的 | 第18-23页 |
| 第一章 槲皮素对心肌细胞缺氧/复氧损伤过程中 14-3-3η蛋白表达的影响 | 第23-35页 |
| 1、材料与方法 | 第23-31页 |
| 1.1 实验动物 | 第23页 |
| 1.2 主要试剂 | 第23-25页 |
| 1.3 实验主要仪器和设备 | 第25页 |
| 1.4 实验方法 | 第25-30页 |
| 1.5 数据处理 | 第30-31页 |
| 2、结果 | 第31-33页 |
| 2.1 各组细胞 A/R 损伤后细胞存活率及 LDH、CPK 活性 | 第31页 |
| 2.2 槲皮素上调 A/R 损伤的新生大鼠原代心肌细胞 14-3-3η蛋白表达水平最佳预处理剂量 | 第31-32页 |
| 2.3 槲皮素上调 A/R 损伤的新生大鼠原代心肌细胞 14-3-3η蛋白表达水平最佳预处理时间 | 第32-33页 |
| 3、讨论 | 第33-34页 |
| 4、本章小结 | 第34-35页 |
| 第二章 槲皮素抗心肌缺血再灌注损伤保护作用依赖于其对 14-3-3η蛋白表达水平的上调 | 第35-52页 |
| 1.材料与方法 | 第36-41页 |
| 1.1 重组腺病毒表达载体 | 第36页 |
| 1.2 主要试剂 | 第36页 |
| 1.3 主要仪器和设备 | 第36页 |
| 1.4 实验方法 | 第36-41页 |
| 1.4.1 实验分组 | 第36-37页 |
| 1.4.2 观察指标及方法 | 第37-41页 |
| 1.5 数据处理 | 第41页 |
| 2.结果 | 第41-50页 |
| 2.1 各组 14-3-3η蛋白表达水平 | 第41-42页 |
| 2.2 感染 14-3-3ηRNAi 腺病毒对槲皮素处理心肌细胞 A/R 损伤后CPK 和 LDH 活性的影响 | 第42-43页 |
| 2.3 感染 14-3-3ηRNAi 腺病毒对槲皮素处理心肌细胞 A/R 损伤后细胞存活率的影响 | 第43-44页 |
| 2.4 感染 14-3-3ηRNAi 腺病毒对槲皮素处理心肌细胞 A/R 损伤诱导的氧化应激的影响 | 第44-46页 |
| 2.5 感染 14-3-3ηRNAi 腺病毒对槲皮素处理心肌细胞 A/R 损伤后线粒体膜电位变化的影响 | 第46-47页 |
| 2.6 感染 14-3-3ηRNAi 腺病毒对槲皮素处理心肌细胞 A/R 损伤引起的 mPTP 开放的影响 | 第47-48页 |
| 2.7 感染 AD14-3-3ηRNAi 对槲皮素处理心肌细胞 A/R 引起的心肌细胞凋亡的影响 | 第48-50页 |
| 3.讨论 | 第50-51页 |
| 4.本章小结 | 第51-52页 |
| 第三章 14-3-3η与 PKCε之间的相互作用及线粒体定位 | 第52-74页 |
| 第1节 Pgex-4t-1/14-3-3η原核表达载体的构建 | 第53-66页 |
| 1.材料与方法 | 第53-62页 |
| 1.1 实验载体 | 第53-54页 |
| 1.2 主要试剂 | 第54-55页 |
| 1.3 主要仪器设备 | 第55页 |
| 1.4 实验方法 | 第55-62页 |
| 2.结果与讨论 | 第62-66页 |
| 2.1 RT-PCR 扩增人野生型 CypD cDNA | 第62-63页 |
| 2.2 TA 克隆质粒 pMD18-T/CypD 的提取纯化及酶切鉴定 | 第63-64页 |
| 2.3 重组质粒 pMD18-T/14-3-3η的测序鉴定 | 第64-65页 |
| 2.4 重组质粒 pGEX-4T-1/14-3-3η的提取纯化及酶切鉴定 | 第65页 |
| 2.5 GST-14-3-3η融合蛋白的鉴定 | 第65-66页 |
| 第二节 14-3-3η与 PKCε之间的相互作用 | 第66-73页 |
| 1.材料与方法 | 第66-69页 |
| 1.1 主要试剂 | 第66-67页 |
| 1.2 实验方法 | 第67-69页 |
| 2.结果 | 第69-71页 |
| 2.1 14-3-3η蛋白和 PKCε蛋白之间存在相互作用 | 第69-70页 |
| 2.2 A/R 损伤的新生大鼠原代心肌细胞内 14-3-3η和 PKCε免疫荧光双染色和线粒体共定位 | 第70-71页 |
| 3.讨论 | 第71-73页 |
| 本章小结 | 第73-74页 |
| 第四章 槲皮素、14-3-3η对 PKCε介导的心肌保护作用的影响 | 第74-111页 |
| 第一节 pADeasy/14-3-3η重组腺病毒表达载体的构建 | 第74-89页 |
| 1.材料与方法 | 第75-84页 |
| 1.1 主要试剂 | 第75页 |
| 1.2 方法 | 第75-83页 |
| 1.3 数据处理 | 第83-84页 |
| 2.结果与讨论 | 第84-89页 |
| 2.1 RT-PCR 扩增 14-3-3η cDNA | 第84页 |
| 2.2 TA 克隆质粒 pMD18-T/14-3-3η的提取纯化及酶切鉴定 | 第84-85页 |
| 2.3 重组质粒 pMD18T/14-3-3η的测序鉴定 | 第85页 |
| 2.4 重组质粒 pShuttle-CMV/14-3-3η的提取纯化及酶切鉴定 | 第85-86页 |
| 2.5 重组质粒 pADeasy-1/14-3-3η的提取纯化及酶切鉴定 | 第86-87页 |
| 2.6 14-3-3η腺病毒载体在 HEK293 细胞中的包装与扩增 | 第87-88页 |
| 2.7 腺病毒载体上调 H9c214-3-3η mRNA 和蛋白的表达 | 第88-89页 |
| 第二节 大鼠野生型 PKCε高表达腺病毒载体的构建 | 第89-94页 |
| 1.材料与方法 | 第89-90页 |
| 1.1 主要试剂与设备（同前） | 第89页 |
| 1.2 方法 | 第89-90页 |
| 1.2.1 PCR 获取大鼠野生型全长 PKCεcDNA | 第89-90页 |
| 1.3 数据处理 | 第90页 |
| 2.结果 | 第90-94页 |
| 2.1 PCR 扩增 PKCεcDNA | 第90-91页 |
| 2.2 重组质粒 pShuttle-CMV/PKCε的测序鉴定 | 第91-92页 |
| 2.3 重组质粒 pADeasy-1/PKCε的提取纯化及酶切鉴定 | 第92页 |
| 2.4 pADeasy/PKCε在 HEK293 细胞中的包装与扩增 | 第92-93页 |
| 2.5 PKCε腺病毒上调大鼠原代心肌细胞 PKCε蛋白的表达 | 第93-94页 |
| 第三节 槲皮素、14-3-3η对 PKCε介导的心肌保护作用的影响 | 第94-110页 |
| 1.材料与方法 | 第95-97页 |
| 1.1 方法 | 第95-96页 |
| 1.2 数据处理 | 第96-97页 |
| 2.结果 | 第97-107页 |
| 2.1 各组细胞 14-3-3η及 PKCε蛋白表达水平 | 第97-98页 |
| 2.2 14-3-3η蛋白参与 PKCε介导的心肌细胞抗 A/R 损伤保护作用 | 第98-99页 |
| 2.3 载体或槲皮素诱导的 14-3-3η蛋白表达上调增强 KCε介导的抗A/R 引起的心肌细胞氧化应激损伤保护作用 | 第99-101页 |
| 2.4 载体或槲皮素诱导的 14-3-3η蛋白高表达促进 A/R 损伤的心肌细胞内 PKCε蛋白的线粒体移位 | 第101-102页 |
| 2.5 载体或槲皮素诱导的 14-3-3η蛋白高表达对 PKCε对 A/R 损伤的心肌细胞线粒体功能的影响 | 第102-105页 |
| 2.6 载体或槲皮素诱导的 14-3-3η蛋白高表达降低 A/R 损伤后心肌细胞 caspase3 活性 | 第105-106页 |
| 2.7 载体或槲皮素诱导的 14-3-3η蛋白高表达增强 PKCε抗 A/R 诱导的心肌细胞凋亡作用 | 第106-107页 |
| 3.讨论 | 第107-110页 |
| 本章小结 | 第110-111页 |
| 全文总结 | 第111-112页 |
| 致谢 | 第112-113页 |
| 参考文献 | 第113-122页 |
| 攻读学位期间的研究成果 | 第122页 |
