| 摘要 | 第5-7页 |
| Abstract | 第7-9页 |
| 前言 | 第15-16页 |
| 第一章 文献综述 | 第16-30页 |
| 1 鲆鲽类常见致病菌疫苗的研究进展 | 第16-22页 |
| 1.1 鲆鲽类渔用疫苗分类 | 第17-20页 |
| 1.1.1 灭活疫苗 | 第17页 |
| 1.1.2 减毒活疫苗 | 第17-18页 |
| 1.1.3 亚单位疫苗 | 第18-19页 |
| 1.1.4 核酸疫苗 | 第19-20页 |
| 1.2 鲆鲽类渔用疫苗存在的问题及前景 | 第20-22页 |
| 2 胶体金免疫层析技术的研究进展 | 第22-29页 |
| 2.1 胶体金及免疫胶体金的性质 | 第22-23页 |
| 2.2 胶体金免疫检测技术的模式 | 第23-25页 |
| 2.2.1 穿流形式 | 第23页 |
| 2.2.2 侧向横流形式 | 第23-25页 |
| 2.3 胶体金免疫层析技术的应用 | 第25-28页 |
| 2.3.1 在食品安全上的应用 | 第25-26页 |
| 2.3.2 在人类临床医学上的应用 | 第26-27页 |
| 2.3.3 在畜牧兽医上的应用 | 第27页 |
| 2.3.4 在水产动物疾病上的应用 | 第27-28页 |
| 2.4 胶体金免疫检测技术存在的问题及展望 | 第28-29页 |
| 2.4.1 提高检测灵敏度 | 第28页 |
| 2.4.2 实现多元化检测 | 第28-29页 |
| 2.4.3 实现半定量及定量检测 | 第29页 |
| 3 本研究的目的与意义 | 第29-30页 |
| 第二章 大菱鲆常见致病菌抗血清的制备与应用 | 第30-39页 |
| 1 材料 | 第30-32页 |
| 1.1 试验鱼及饲养条件 | 第30-31页 |
| 1.2 主要试剂 | 第31页 |
| 1.3 主要仪器设备与用品 | 第31页 |
| 1.4 主要溶液的配制 | 第31-32页 |
| 2 方法 | 第32-33页 |
| 2.1 菌株来源及接种培养 | 第32页 |
| 2.2 灭活疫苗的制备 | 第32-33页 |
| 2.3 大菱鲆的免疫与采血 | 第33页 |
| 2.4 酶联免疫吸附试验(ELISA) | 第33页 |
| 3 结果 | 第33-37页 |
| 3.1 迟缓爱德华氏菌血清抗体效价变化 | 第33-34页 |
| 3.2 各疫苗抗体效价 | 第34-35页 |
| 3.3 病原菌及菌蛋白与各抗血清的交叉反应 | 第35-37页 |
| 3.3.1 病原菌与各抗血清的交叉反应 | 第35-36页 |
| 3.3.2 迟缓爱德华菌鞭毛蛋白与各抗血清的交叉反应 | 第36-37页 |
| 4 讨论与小结 | 第37-39页 |
| 第三章 大菱鲆免疫球蛋白 IgM 单克隆抗体的制备及特性分析 | 第39-49页 |
| 1 材料 | 第39-41页 |
| 1.1 免疫球蛋白来源 | 第39-40页 |
| 1.2 实验动物、细胞 | 第40页 |
| 1.3 主要试剂 | 第40页 |
| 1.4 主要仪器设备和用品 | 第40页 |
| 1.5 主要溶液的配制 | 第40-41页 |
| 2 方法 | 第41-46页 |
| 2.1 单抗的制备 | 第41-44页 |
| 2.1.1 免疫程序 | 第41-42页 |
| 2.1.2 饲养细胞制备 | 第42页 |
| 2.1.3 细胞融合 | 第42-43页 |
| 2.1.4 单抗的筛选 | 第43页 |
| 2.1.5 克隆 | 第43页 |
| 2.1.6 单抗的大量生产 | 第43-44页 |
| 2.2 单抗特性鉴定 | 第44-45页 |
| 2.2.1 Western blot 分析 | 第44-45页 |
| 2.2.2 ELISA 法测定单抗效价 | 第45页 |
| 2.2.3 单抗灵敏度的测定 | 第45页 |
| 2.3 单抗特异性测定 | 第45-46页 |
| 3 结果 | 第46-48页 |
| 3.1 单抗的筛选 | 第46页 |
| 3.2 单抗特性的鉴定 | 第46-47页 |
| 3.3 单抗特异性的测定 | 第47-48页 |
| 4 讨论与小结 | 第48-49页 |
| 第四章 迟缓爱德华氏菌抗体胶体金检测试纸的研制与应用 | 第49-61页 |
| 1 材料 | 第49页 |
| 1.1 主要试剂 | 第49页 |
| 1.2 主要仪器设备及用品 | 第49页 |
| 2 方法 | 第49-54页 |
| 2.1 试纸条的制备 | 第49-53页 |
| 2.1.1 细菌抗原的制备 | 第49-50页 |
| 2.1.2 胶体金的制备 | 第50页 |
| 2.1.3 大菱鲆免疫球蛋白单克隆抗体的纯化 | 第50页 |
| 2.1.4 最适标记蛋白量的确定 | 第50-51页 |
| 2.1.5 金标抗体及金标抗体玻璃纤维素膜的制备 | 第51页 |
| 2.1.6 Dot-ELISA | 第51-52页 |
| 2.1.7 硝酸纤维素膜的处理 | 第52页 |
| 2.1.8 试纸条的组装 | 第52页 |
| 2.1.9 检测与结果判读 | 第52-53页 |
| 2.2 试纸条的性能测试 | 第53-54页 |
| 2.2.1 试纸条的渗透速度试验 | 第53页 |
| 2.2.2 试纸条的重复性试验 | 第53页 |
| 2.2.3 试纸条的稳定性试验 | 第53页 |
| 2.2.4 试纸条的特异性检测 | 第53页 |
| 2.2.5 试纸条的灵敏度检验 | 第53-54页 |
| 3 结果 | 第54-60页 |
| 3.1 试纸条的制备 | 第54-56页 |
| 3.1.1 胶体金的制备 | 第54-55页 |
| 3.1.2 单克隆抗体的最佳标记浓度 | 第55页 |
| 3.1.3 Dot-Elisa 法检测金标单抗与大菱鲆抗体的反应 | 第55页 |
| 3.1.4 试纸条的组装及结果的判定 | 第55-56页 |
| 3.2 试纸条性能测试 | 第56-60页 |
| 3.2.1 试纸条的渗透速度试验 | 第56页 |
| 3.2.2 试纸条的重复性试验 | 第56-57页 |
| 3.2.3 试纸条的稳定性试验 | 第57页 |
| 3.2.4 试纸条的特异性分析 | 第57页 |
| 3.2.5 试纸条的灵敏度分析 | 第57-60页 |
| 4 讨论与小结 | 第60-61页 |
| 全文总结 | 第61-63页 |
| 1 研究结论 | 第61页 |
| 2 创新点 | 第61页 |
| 3 研究不足与展望 | 第61-63页 |
| 参考文献 | 第63-76页 |
| 致谢 | 第76-77页 |
| 个人简历 | 第77页 |
| 发表的学术论文与研究成果 | 第77-78页 |
