中文摘要 | 第5-7页 |
Abstract | 第7-9页 |
前言 | 第10-13页 |
第一部分 生物信息学预测 | 第13-17页 |
1. 原理 | 第13页 |
2. 方法 | 第13-14页 |
2.1 TLR4 mRNA 3′UTR 序列获取及其二级结构分析 | 第13-14页 |
2.2 Targetscan 预测以 TLR4 为靶基因的 miRNA | 第14页 |
2.3 MiRDB 预测以 TLR4 为靶基因的 miRNA | 第14页 |
3. 结果 | 第14-16页 |
3.1 TLR4 mRNA 3′UTR 序列及其二级结构 | 第14-15页 |
3.2 Targetscan 预测结果 | 第15页 |
3.3 MiRDB 预测结果 | 第15-16页 |
4. 小结 | 第16-17页 |
第二部分 体外细胞实验验证 miR-181a 下调 TLR4 表达,抑制巨噬细胞表达炎症介质 | 第17-41页 |
1. 实验细胞 | 第17页 |
2. 主要试剂 | 第17-18页 |
3. 主要仪器与器材 | 第18-19页 |
4. 实验方法 | 第19-30页 |
4.1 高表达 TLR4 细胞株的选取 | 第19-20页 |
4.2 细胞培养 | 第20页 |
4.3 转染及 LPS 刺激 | 第20-21页 |
4.4 细胞上清液的收集 | 第21页 |
4.5 ELISA | 第21-22页 |
4.6 总 RNA 提取 | 第22-23页 |
4.7 qPCR 与 RT-PCR | 第23-25页 |
4.8 蛋白提取及定量 | 第25-26页 |
4.9 western blot | 第26-27页 |
4.10 相对荧光素酶活性法检测 miR-181a 与 TLR4 mRNA 的靶向结合活性 | 第27-30页 |
5. 实验结果 | 第30-41页 |
5.1 ELISA 测定的培养基中 TNF-α、IL-1β、IL-6 含量 | 第30-34页 |
5.2 qPCR 检测的细胞内 miR-181a 相对表达量 | 第34页 |
5.3 RT-PCR 检测的细胞内 TLR4 mRNA 表达水平 | 第34-35页 |
5.4 western blot 检测的细胞内 TLR4 蛋白水平 | 第35-36页 |
5.5 RT-PCR 检测的细胞内 TNF-α、IL-1β、IL-6 mRNA 表达水平 | 第36-39页 |
5.6 荧光素酶报告基因技术检测的 miR-181a 与 TLR4 mRNA 的靶向结合活性 | 第39-41页 |
讨论 | 第41-44页 |
结论 | 第44-45页 |
参考文献 | 第45-47页 |
主要英文缩略语索引 | 第47-48页 |
文献综述 | 第48-53页 |
参考文献 | 第51-53页 |
硕士期间发表的论文 | 第53-54页 |
致谢 | 第54-55页 |
基金资助 | 第55页 |