| 中文摘要 | 第3-5页 |
| 英文摘要 | 第5-7页 |
| 1 前言 | 第11-24页 |
| 1.1 引言 | 第11-12页 |
| 1.2 柑橘溃疡病菌 | 第12-13页 |
| 1.2.1 柑橘溃疡病菌主要生物学特性 | 第12页 |
| 1.2.2 柑橘溃疡病流行病学特点及危害现状 | 第12-13页 |
| 1.3 茄科青枯菌 | 第13-14页 |
| 1.3.1 茄科青枯菌主要生物学特性 | 第13页 |
| 1.3.2 青枯病流行病学特点及危害现状 | 第13-14页 |
| 1.4 细菌性植物病害检测方法研究进展 | 第14-17页 |
| 1.4.1 传统的检测方法 | 第14页 |
| 1.4.2 免疫学检测方法 | 第14-15页 |
| 1.4.3 分子生物学检测方法 | 第15-17页 |
| 1.5 微生物活体检测技术 | 第17-19页 |
| 1.5.1 以细胞膜完整性为基础的活体检测新技术 | 第17-18页 |
| 1.5.2 基于酶活性检测的活体检测新技术 | 第18页 |
| 1.5.3 基于细胞呼吸作用的检测方法 | 第18页 |
| 1.5.4 以 PCR 为基础的活细胞检测方法 | 第18-19页 |
| 1.6 EMA 结合 PCR 的新型微生物活体检测技术 | 第19-20页 |
| 1.6.1 原理简介 | 第19-20页 |
| 1.6.2 技术的应用 | 第20页 |
| 1.7 研究目的、研究内容和技术路线 | 第20-23页 |
| 1.7.1 研究目的 | 第20-21页 |
| 1.7.2 研究内容 | 第21-22页 |
| 1.7.3 技术路线 | 第22-23页 |
| 1.8 本研究的创新点 | 第23-24页 |
| 2 柑橘溃疡病菌 EMA-PCR 快速活体检测技术的建立 | 第24-37页 |
| 2.1 材料与仪器 | 第24-26页 |
| 2.1.1 供试菌株 | 第24-25页 |
| 2.1.2 主要试剂及耗材 | 第25页 |
| 2.1.3 主要仪器设备 | 第25页 |
| 2.1.4 培养基 | 第25-26页 |
| 2.2 方法 | 第26-30页 |
| 2.2.1 柑橘溃疡病菌死、活细胞菌悬液的制备 | 第26页 |
| 2.2.2 柑橘溃疡病菌特异性检测引物和 PCR 条件优化和常规 PCR 性能检测 | 第26-27页 |
| 2.2.3 EMA-PCR 样品的前处理 | 第27页 |
| 2.2.4 病原菌活细胞对 EMA 染料的耐受能力分析 | 第27-28页 |
| 2.2.5 抑制死菌 PCR 反应的最小 EMA 浓度的确定 | 第28页 |
| 2.2.6 EMA 最佳曝光时间的确定 | 第28页 |
| 2.2.7 EMA-PCR 对死活细胞混合液的渗透处理 | 第28-29页 |
| 2.2.8 PCR 产物检测和定量分析 | 第29页 |
| 2.2.9 EMA-PCR 对柑橘溃疡病菌可疑样品的检测与平板计数法和常规 PCR 检测结果的比较 | 第29-30页 |
| 2.3 结果与分析 | 第30-36页 |
| 2.3.1 一定浓度柑橘溃疡病病菌悬液的制备与致死时间的确定 | 第30-31页 |
| 2.3.2 常规 PCR 检测体系优化结果 | 第31-32页 |
| 2.3.3 抑制纯培养死细胞 DNA 扩增的最适 EMA 浓度 | 第32-33页 |
| 2.3.4 光解激活 EMA 的曝光时间优化 | 第33-34页 |
| 2.3.5 PCR 混合反应体系中活菌数目的对数值与相对荧光强度的线性关系 | 第34-35页 |
| 2.3.6 EMA-PCR 方法检测柑橘溃疡病可疑样品 | 第35-36页 |
| 2.4 本章小结 | 第36-37页 |
| 3 茄科青枯菌 EMA-PCR 活体定量检测技术的建立 | 第37-52页 |
| 3.1 材料与仪器 | 第37-38页 |
| 3.1.1 供试菌株及土壤样品来源 | 第37-38页 |
| 3.1.2 主要试剂及耗材 | 第38页 |
| 3.1.3 主要仪器设备 | 第38页 |
| 3.1.4 所用培养基及试剂 | 第38页 |
| 3.2 方法 | 第38-42页 |
| 3.2.1 青枯菌死活菌悬液的制备 | 第38页 |
| 3.2.2 青枯菌常规定量 PCR 检测体系优化 | 第38-39页 |
| 3.2.3 EMA-PCR 样品的前处理 | 第39页 |
| 3.2.4 EMA 处理条件的优化和青枯病死、活细胞的处理 | 第39-40页 |
| 3.2.5 青枯菌 VBNC 状态的诱导 | 第40-41页 |
| 3.2.6 不同温度短期处理活菌的 EMA-qPCR 检测方法与平板菌落计数法的比较 | 第41页 |
| 3.2.7 EMA-qPCR 检测方法的假阳性验证 | 第41页 |
| 3.2.8 人工接菌的土壤样品中青枯菌的 EMA-qPCR 扩增 | 第41-42页 |
| 3.3 结果与分析 | 第42-50页 |
| 3.3.1 青枯菌平板培养计数结果和致死条件 | 第42页 |
| 3.3.2 青枯菌实时荧光定量 PCR 检测体系 | 第42-43页 |
| 3.3.3 抑制纯培养死细胞 DNA 扩增的最适 EMA 浓度 | 第43-45页 |
| 3.3.4 死、活细胞混合体系中 EMA-qPCR 对活细胞的选择性扩增 | 第45-46页 |
| 3.3.5 处于 VBNC 状态的青枯菌的 EMA-qPCR 方法检测 | 第46-47页 |
| 3.3.6 不同温度短期处理后青枯菌的存活情况的 EMA-qPCR 检测 | 第47-48页 |
| 3.3.7 EMA-qPCR 检测方法的假阳性验证 | 第48页 |
| 3.3.8 土壤中青枯菌的定量 PCR 检测及 EMA-qPCR 检测实用性 | 第48-50页 |
| 3.4 本章小结 | 第50-52页 |
| 4 讨论 | 第52-54页 |
| 4.1 抑制不同菌死细胞 DNA 扩增的最适 EMA 浓度异同 | 第52页 |
| 4.2 EMA 曝光激活时间 | 第52页 |
| 4.3 细菌 VBNC 状态检测的新方法 | 第52-54页 |
| 5 主要研究结论与后续工作思路 | 第54-55页 |
| 5.1 主要研究结论 | 第54页 |
| 5.2 后续工作思路 | 第54-55页 |
| 致谢 | 第55-56页 |
| 参考文献 | 第56-63页 |
| 附录 | 第63页 |
