| 摘要 | 第8-10页 |
| Abstract | 第10-12页 |
| 缩略语表（Abbreviation） | 第13-16页 |
| 第1章 文献综述 | 第16-43页 |
| 1.1 冠状病毒 | 第16-21页 |
| 1.1.1 冠状病毒概况 | 第16-17页 |
| 1.1.2 冠状病毒的分类 | 第17-18页 |
| 1.1.3 冠状病毒受体识别机制 | 第18-21页 |
| 1.2 猪流行性腹泻病毒 | 第21-31页 |
| 1.2.1 PEDV的流行情况 | 第21-23页 |
| 1.2.2 PEDV的基因组 | 第23-31页 |
| 1.3 PEDV S蛋白 | 第31-35页 |
| 1.3.1 PEDV S基因结构 | 第31-32页 |
| 1.3.2 PEDV S蛋白的功能 | 第32-34页 |
| 1.3.3 PEDV S基因的变异性 | 第34-35页 |
| 1.4 APN蛋白 | 第35-39页 |
| 1.4.1 APN蛋白的功能 | 第35-37页 |
| 1.4.2 APN蛋白的结构 | 第37-39页 |
| 1.4.3 APN蛋白的作用机理 | 第39页 |
| 1.5 冠状病毒NSP9蛋白 | 第39-43页 |
| 1.5.1 NSP9蛋白的功能 | 第39-41页 |
| 1.5.2 NSP9蛋白的结构 | 第41-43页 |
| 第2章 PEDV S蛋白受体识别特性 | 第43-83页 |
| 2.1 研究目的及意义 | 第43-44页 |
| 2.2 实验材料 | 第44-49页 |
| 2.2.1 细胞、毒株与菌株 | 第44页 |
| 2.2.2 载体与质粒 | 第44-45页 |
| 2.2.3 工具酶及主要试剂 | 第45-46页 |
| 2.2.4 重要仪器和设备 | 第46页 |
| 2.2.5 主要缓冲液与相关试剂的配制 | 第46-49页 |
| 2.2.6 分子生物学分析软件及数据库 | 第49页 |
| 2.3 实验方法 | 第49-64页 |
| 2.3.1 基因合成 | 第49-50页 |
| 2.3.2 分子克隆 | 第50-54页 |
| 2.3.3 质粒转化DH10Bac | 第54页 |
| 2.3.4 Bacmid的提取 | 第54-55页 |
| 2.3.5 Bacmid转染sf9细胞 | 第55-56页 |
| 2.3.6 目的蛋白的表达与鉴定 | 第56-57页 |
| 2.3.7 病毒的扩增 | 第57页 |
| 2.3.8 目的蛋白的纯化 | 第57-60页 |
| 2.3.9 pAPN蛋白在HEK-293T细胞中的超表达 | 第60-62页 |
| 2.3.10 流式细胞实验 | 第62页 |
| 2.3.11 ELISA实验 | 第62-63页 |
| 2.3.12 点杂交实验 | 第63-64页 |
| 2.3.13 Pull-down实验 | 第64页 |
| 2.4 实验结果与分析 | 第64-77页 |
| 2.4.1 PEDV受体结合域的鉴定 | 第64-67页 |
| 2.4.2 PEDV经典弱毒株和变异毒株受体结合力的比较 | 第67-69页 |
| 2.4.3 PEDV S1 C-terminus与TGEV、PRCV、HCoV-NL63 RBDs在结构和序列上的相似性 | 第69-70页 |
| 2.4.4 PEDV具有不同于TGEV、PRCV及HCoV-NL63的受体识别模式 | 第70-75页 |
| 2.4.5 PEDV糖结合区域的鉴定及PEDV经典弱毒株和变异毒株糖结合力的比较 | 第75-77页 |
| 2.5 讨论 | 第77-82页 |
| 2.5.1 冠状病毒受体识别机制 | 第77-78页 |
| 2.5.2 PEDV RBD位于S1蛋白C端 | 第78-79页 |
| 2.5.3 PEDV受体识别模式异于其它 α 冠状病毒 | 第79-80页 |
| 2.5.4 PEDV能识别糖作为其辅助受体 | 第80-81页 |
| 2.5.5 PEDV经典弱毒株和变异毒株受体结合力的差异 | 第81-82页 |
| 2.6 小结 | 第82-83页 |
| 第3章 PEDV NSP9蛋白的结构及核苷酸结合功能的研究 | 第83-123页 |
| 3.1 研究目的及意义 | 第83页 |
| 3.2 实验材料 | 第83-85页 |
| 3.2.1 毒株与菌株 | 第83页 |
| 3.2.2 载体及质粒 | 第83-84页 |
| 3.2.3 工具酶及主要试剂 | 第84页 |
| 3.2.4 重要仪器和设备 | 第84-85页 |
| 3.2.5 主要缓冲液与相关试剂的配制 | 第85页 |
| 3.2.6 分子生物学分析软件及数据库 | 第85页 |
| 3.3 实验方法 | 第85-92页 |
| 3.3.1 病毒RNA的提取 | 第85-86页 |
| 3.3.2 RNA反转录合成cDNA | 第86页 |
| 3.3.3 引物设计与合成 | 第86页 |
| 3.3.4 目的蛋白的表达 | 第86-87页 |
| 3.3.5 目的蛋白的纯化 | 第87-88页 |
| 3.3.6 晶体的生长 | 第88-89页 |
| 3.3.7 晶体衍射数据的收集与处理 | 第89页 |
| 3.3.8 晶体结构的解析 | 第89页 |
| 3.3.9 Cross-linking实验 | 第89-90页 |
| 3.3.10 分析型超速离心 | 第90页 |
| 3.3.11 荧光标记ssDNA的合成 | 第90-91页 |
| 3.3.12 凝胶迁移阻滞实验（EMSA） | 第91页 |
| 3.3.13 微量热泳动仪技术（Microscale thermophoresis，MST）实验 | 第91-92页 |
| 3.4 结果与分析 | 第92-119页 |
| 3.4.1 PEDV NSP9蛋白结构解析 | 第92-96页 |
| 3.4.2 PEDV NSP9蛋白单体结构 | 第96-97页 |
| 3.4.3 PEDV NSP9蛋白二聚体结构 | 第97-101页 |
| 3.4.4 PEDV NSP9蛋白聚合状态 | 第101-103页 |
| 3.4.5 二聚体形成相关氨基酸突变对其聚合状态的影响 | 第103-106页 |
| 3.4.6 二硫键在PEDV NSP9蛋白二聚体形成中的重要性 | 第106-110页 |
| 3.4.7 PEDV NSP9蛋白与其它冠状病毒NSP9蛋白在序列和结构上的相似性 | 第110-112页 |
| 3.4.8 PEDV NSP9蛋白中参与二聚体形成的关键氨基酸对其核苷酸结合的影响 | 第112-114页 |
| 3.4.9 PEDV NSP9蛋白中正电荷氨基酸对其核苷酸结合力的影响 | 第114-117页 |
| 3.4.10 不同片段长度的核苷酸结合PEDV NSP9蛋白的能力 | 第117-119页 |
| 3.5 讨论 | 第119-122页 |
| 3.5.1 PEDV NSP9蛋白结构与其它冠状病毒NSP9蛋白结构的异同 | 第119-120页 |
| 3.5.2 NSP9蛋白中参与二聚体形成的关键氨基酸对其核苷酸结合力及病毒复制的影响 | 第120-121页 |
| 3.5.3 关键氨基酸位点的突变对PEDV NSP9蛋白核苷酸结合力的影响 | 第121页 |
| 3.5.4 冠状病毒NSP9-核苷酸复合物结构模型 | 第121-122页 |
| 3.6 小结 | 第122-123页 |
| 第4章 结论 | 第123-124页 |
| 参考文献 | 第124-153页 |
| 附录 | 第153-158页 |
| 附录1 合成的CHGD-01 S1基因核苷酸序列 | 第153-154页 |
| 附录2 合成的CHGD-01 S1蛋白氨基酸序列 | 第154-155页 |
| 附录3 合成的CV777 S1基因核苷酸序列 | 第155-157页 |
| 附录4 合成的CV777 S1蛋白氨基酸序列 | 第157-158页 |
| 致谢 | 第158-160页 |
| 个人资料 | 第160-162页 |
