| 英文缩略词表(Abbreviation) | 第8-10页 |
| 中文摘要 | 第10-15页 |
| 英文摘要 | 第15-21页 |
| 1 前言 | 第22-25页 |
| 2 实验材料 | 第25-29页 |
| 2.1. RA临床病例选择 | 第25-26页 |
| 2.2 药物与试剂 | 第26-28页 |
| 2.3 仪器与设备 | 第28-29页 |
| 3 实验方法 | 第29-43页 |
| 3.1 体检 | 第29页 |
| 3.2 常规检查和其他免疫学指标的测定方法 | 第29页 |
| 3.3 Ficoll密度梯度离心法分离PBMC并纯化 | 第29-30页 |
| 3.3.1 外周血单个核细胞分离方法 | 第29-30页 |
| 3.3.2 细胞计数及活性检测 | 第30页 |
| 3.4 ELISA法检测血清中sIgD和sRANKL的表达量 | 第30页 |
| 3.5 流式细胞术检测人外周血T、B细胞上IgD和IgDR的表达 | 第30-31页 |
| 3.5.1 IgD蛋白的生物素标记 | 第30-31页 |
| 3.5.2 流式细胞术检测IgDR的表达 | 第31页 |
| 3.5.3 流式细胞术检测T、B细胞亚群上IgD和IgDR的表达 | 第31页 |
| 3.6 CCK-8法检测PHA和IgD对PBMC细胞活力的影响 | 第31-32页 |
| 3.7 流式细胞术检测IgD对人外周血T、B细胞亚群的影响 | 第32-33页 |
| 3.7.1 IgD对人外周血T细胞亚群的影响 | 第32-33页 |
| 3.7.2 IgD对人外周血B细胞亚群的影响 | 第33页 |
| 3.8 抗体芯片检测PBMC上清中细胞因子水平 | 第33-35页 |
| 3.9 人CD4~+T细胞的分离与鉴定 | 第35页 |
| 3.10 Western blot法检测CD4~+T细胞Lck、p-Lck和IgDR的表达 | 第35-38页 |
| 3.10.1 T细胞预处理 | 第35页 |
| 3.10.2 CD4~+T蛋白质的提取 | 第35-36页 |
| 3.10.3 蛋白质样本的定量(BSA法) | 第36页 |
| 3.10.4 Western blot的方法步骤 | 第36-38页 |
| 3.11 CCK-8法检测IgD对抑制剂处理的CD4~+T细胞活力的影响 | 第38页 |
| 3.12 人滑膜细胞(FLS)的分离和培养 | 第38页 |
| 3.13 流式细胞术检测FLS细胞表面IgD和IgDR的表达 | 第38-39页 |
| 3.14 激光共聚焦技术检测FLS中IgDR的表达 | 第39页 |
| 3.15 IgD-IgDR结合亲和力实验 | 第39-41页 |
| 3.15.1 IgD结合CD4~+T细胞表面IgDR亲和力实验 | 第39-40页 |
| 3.15.2 IgD结合FLS表面IgDR亲和力实验 | 第40页 |
| 3.15.3 绘制饱和曲线 | 第40页 |
| 3.15.4 最大结合量Bmx和解离常数KD | 第40-41页 |
| 3.16 CCK-8法检测IgD对FLS细胞活力的影响 | 第41页 |
| 3.17 Western blot检测IgD对FLS中IgDR蛋白表达的影响 | 第41页 |
| 3.18 抗体芯片检测FLS细胞上清中细胞因子水平 | 第41-42页 |
| 3.19 统计学分析 | 第42-43页 |
| 4 结果 | 第43-91页 |
| 4.1 RA患者和健康对照者资料 | 第43页 |
| 4.2 RA患者和健康对照者血清中sIgD水平差异 | 第43-44页 |
| 4.3 RA患者和健康对照者血清中sRANKL水平差异 | 第44-45页 |
| 4.4 血清中sIgD与sRANKL、RF和CRP相关性 | 第45-47页 |
| 4.5 人外周血T、B细胞上mIgD的表达 | 第47-49页 |
| 4.6 流式细胞术检测IgDR表达的方法学建立 | 第49-50页 |
| 4.7 人外周血T、B细胞上IgDR的表达 | 第50-52页 |
| 4.8 IgD对健康对照者和RA患者PBMC增殖的影响 | 第52-55页 |
| 4.8.1 PHA刺激健康对照者PBMC的亚适浓度和时间的选择 | 第52页 |
| 4.8.2 IgD对健康对照者PBMC增殖影响 | 第52-54页 |
| 4.8.3 IgD对健康对照者和RA患者PBMC增殖作用的差异 | 第54-55页 |
| 4.9 IgD对健康对照者和RA患者外周血T、B细胞亚群的影响 | 第55-66页 |
| 4.9.1 IgD对健康对照者PBMC中T细胞各亚群的影响 | 第55-56页 |
| 4.9.2 IgD对RA患者PBMC中T细胞各亚群的影响 | 第56-57页 |
| 4.9.3 IgD对健康对照者PBMC中B细胞各亚群的影响 | 第57-59页 |
| 4.9.4 IgD对RA患者PBMC中B细胞各亚群的影响 | 第59-62页 |
| 4.9.5 IgD对RA患者和健康对照者PBMC中T细胞亚群作用的差异 | 第62-63页 |
| 4.9.6 IgD对RA患者和健康对照者PBMC中B细胞亚群作用的差异 | 第63页 |
| 4.9.7 IgD对健康对照者PBMC中Th17/Treg细胞亚群平衡的影响 | 第63-66页 |
| 4.10 IgD对健康对照者和RA患者PBMC分泌细胞因子的影响 | 第66-69页 |
| 4.10.1 IgD对健康对照者PBMC培养上清中细胞因子的影响 | 第66页 |
| 4.10.2 IgD对RA患者PBMC培养上清中细胞因子的影响 | 第66页 |
| 4.10.3 IgD对健康对照者和RA患者PBMC分泌细胞因子作用比较 | 第66-69页 |
| 4.11 IgD对健康对照者和RA患者外周血T、B细胞上IgDR表达的影响 | 第69-74页 |
| 4.11.1 IgD对健康对照者PBMC中T细胞表面IgDR表达的影响 | 第69-70页 |
| 4.11.2 IgD对健康对照者PBMC中B细胞表面IgDR表达的影响 | 第70-71页 |
| 4.11.3 IgD对RA患者PBMC中T细胞表面IgDR表达的影响 | 第71-72页 |
| 4.11.4 IgD对RA患者PBMC中B细胞表面IgDR表达的影响 | 第72-73页 |
| 4.11.5 IgD对健康对照者和RA患者PBMC中T、B细胞IgDR作用的比较 | 第73-74页 |
| 4.12 IgD对T细胞PTK信号通路的影响 | 第74-80页 |
| 4.12.1 CD4~+T细胞的分选和鉴定 | 第74页 |
| 4.12.2 IgD刺激CD4~+T细胞后不同时间点IgDR表达的变化 | 第74-75页 |
| 4.12.3 不同浓度IgD刺激CD4~+T细胞后IgDR表达的变化 | 第75-76页 |
| 4.12.4 IgD促进CD4~+T细胞Lck的活化 | 第76-77页 |
| 4.12.5 PTK抑制剂Herbimycin A对IgD刺激CD4~+T细胞后Lck活化的影响 | 第77-78页 |
| 4.12.6 Lck抑制剂A770041对IgD刺激CD4~+T细胞后Lck活化的影响 | 第78-79页 |
| 4.12.7 PTK抑制剂对IgD促进细胞增殖作用的影响 | 第79-80页 |
| 4.13 FLS的分离与培养 | 第80页 |
| 4.14 IgD和IgDR在FLS上的表达 | 第80-82页 |
| 4.14.1 流式细胞仪检测FLS膜表面IgD和IgDR的表达 | 第80-81页 |
| 4.14.2 激光共聚焦检测FLS中IgDR的表达和分布 | 第81-82页 |
| 4.15 IgD对健康对照者和RA患者FLS细胞增殖的影响 | 第82-84页 |
| 4.16 IgD对FLS分泌细胞因子的影响 | 第84-86页 |
| 4.17 IgD对RA-FLS中IgDR的表达的影响 | 第86-87页 |
| 4.17.1 流式细胞仪检测IgD对RA-FLS表面IgDR的表达的影响 | 第86-87页 |
| 4.17.2 Western blot检测IgD对RA-FLS总IgDR蛋白表达量的影响 | 第87页 |
| 4.18 IgD与IgDR结合的亲和力实验 | 第87-91页 |
| 4.18.1 IgD结合CD4~+T细胞表面IgDR的亲和力 | 第87-88页 |
| 4.18.2 IgD结合FLS表面IgDR的亲和力 | 第88-91页 |
| 5 讨论 | 第91-100页 |
| 5.1 IgD及IgDR变化可能是促进RA发生发展的重要因素 | 第91-93页 |
| 5.2 IgD参与了RA的T、B细胞活化 | 第93-95页 |
| 5.3 IgD通过其受体IgDR活化Lck信号，促进T细胞活化 | 第95-97页 |
| 5.4 IgD作用其受体IgDR，促进RA患者：FLS异常活化和炎性病变 | 第97-100页 |
| 6 结论 | 第100-101页 |
| 7 创新之处 | 第101页 |
| 8 下一步工作设想 | 第101-102页 |
| 参考文献 | 第102-113页 |
| 附录 | 第113-118页 |
| 致谢 | 第118-120页 |
| 综述：IgD及其受体信号研究进展 | 第120-134页 |
| 参考文献 | 第129-134页 |
