奶山羊BLG基因敲除载体的构建
| 摘要 | 第1-6页 |
| ABSTRACT | 第6-9页 |
| 文献综述 | 第9-23页 |
| 第一章 体细胞介导的基因打靶转基因家畜研究进展 | 第9-20页 |
| ·打靶载体的同源臂 | 第11-13页 |
| ·打靶载体的转染方法 | 第13页 |
| ·筛选策略 | 第13-14页 |
| ·基因组位点的影响 | 第14-15页 |
| ·原代细胞及其培养条件 | 第15-17页 |
| ·提高重组效率的策略 | 第17-20页 |
| 第二章 Β-乳球蛋白及其编码基因研究进展 | 第20-23页 |
| ·Β-乳球蛋白及其基因组成与结构 | 第20-21页 |
| ·BLG 的生理功能 | 第21页 |
| ·对BLG 过敏原的研究及其解决方法 | 第21-23页 |
| ·破坏致敏部位消除BLG 致敏性的方法 | 第22页 |
| ·掩饰致敏部位以消除致敏性的方法 | 第22页 |
| ·其他方法 | 第22-23页 |
| 试验研究 | 第23-48页 |
| 第三章 奶山羊BLG 基因敲除载体的构建及验证 | 第23-38页 |
| ·材料和方法 | 第23-31页 |
| ·材料 | 第23-25页 |
| ·方法 | 第25-31页 |
| ·结果与分析 | 第31-35页 |
| ·奶山羊基因组的提取 | 第31页 |
| ·同源臂的克隆与鉴定 | 第31-32页 |
| ·载体构建及鉴定 | 第32-35页 |
| ·讨论 | 第35-37页 |
| ·乳过敏症的解决方法 | 第35-36页 |
| ·基因敲除位点的选择 | 第36页 |
| ·基因打靶方案选择及基因敲除载体的设计 | 第36-37页 |
| ·小结 | 第37-38页 |
| 第四章 山羊BLG 基因敲除载体的细胞转染和筛选 | 第38-48页 |
| ·材料和方法 | 第38-41页 |
| ·材料 | 第38-39页 |
| ·方法 | 第39-41页 |
| ·结果与分析 | 第41-45页 |
| ·胎儿成纤维细胞系对G418 的耐受分析 | 第41页 |
| ·pBLG2T 质粒线性化 | 第41-42页 |
| ·细胞筛选 | 第42-45页 |
| ·阳性细胞克隆的PCR 鉴定 | 第45页 |
| ·讨论 | 第45-47页 |
| ·电转染最适条件的选择及摸索 | 第45-46页 |
| ·G418 和GANC 筛选浓度的选择 | 第46页 |
| ·阳性克隆细胞的鉴定 | 第46-47页 |
| ·小结 | 第47-48页 |
| 结论 | 第48-49页 |
| 参考文献 | 第49-57页 |
| 附录 | 第57-69页 |
| 致谢 | 第69-70页 |
| 个人简介 | 第70页 |
