| 摘要 | 第6-8页 |
| Abstract | 第8-9页 |
| 第一章 引言 | 第15-24页 |
| 1.1 激发子的研究现状 | 第15页 |
| 1.2 蛋白互作研究方法 | 第15-17页 |
| 1.2.1 体内蛋白互作 | 第15-16页 |
| 1.2.2 体外互作研究法 | 第16-17页 |
| 1.3 利用RNAi研究基因的功能 | 第17-18页 |
| 1.3.1 RNAi | 第17页 |
| 1.3.2 RNA干涉机制 | 第17-18页 |
| 1.3.3 RNAi的特点 | 第18页 |
| 1.3.4 RNAi技术在植物学中的应用 | 第18页 |
| 1.4 转基因技术研究基因的功能 | 第18-21页 |
| 1.4.1 获取转基因烟草的几种方法 | 第19页 |
| 1.4.2 转基因植物的筛选 | 第19-20页 |
| 1.4.3 转基因烟草的检测方法 | 第20-21页 |
| 1.5 蛋白质激发子PevD1及其结合蛋白Nbnrp1的研究背景 | 第21-22页 |
| 1.5.1 蛋白质激发子PevD1 | 第21页 |
| 1.5.2 PevD1的互作蛋白Nbnrp1 | 第21-22页 |
| 1.6 本研究目的和意义 | 第22页 |
| 1.7 研究技术路线 | 第22-24页 |
| 第二章 PevD1与Nbnrp1的互作位点确定 | 第24-37页 |
| 2.1 实验材料 | 第24-25页 |
| 2.1.1 菌株与质粒 | 第24页 |
| 2.1.2 实验试剂与仪器 | 第24-25页 |
| 2.2 试验方法 | 第25-32页 |
| 2.2.1 Nbnrp1生物信息学分析 | 第25页 |
| 2.2.2 酵母双杂交载体构建 | 第25-27页 |
| 2.2.3 酵母双杂交实验 | 第27-28页 |
| 2.2.4 蛋白质激发子PevD1的原核表达 | 第28-29页 |
| 2.2.5 Nbnrp1△N蛋白的体外重组表达及纯化 | 第29-31页 |
| 2.2.6 GST pull-down实验 | 第31-32页 |
| 2.3 结果与分析 | 第32-36页 |
| 2.3.1 Nbnrp1蛋白的生物信息学分析 | 第32页 |
| 2.3.2 酵母双杂交结果 | 第32-33页 |
| 2.3.3 蛋白质PevD1的表达纯化 | 第33-34页 |
| 2.3.4 蛋白质Nbnrp1ΔN的表达纯化 | 第34-35页 |
| 2.3.5 GST pull-down实验结果分析 | 第35-36页 |
| 2.4 本章小结与讨论 | 第36-37页 |
| 第三章 Nbnrp1与Pev D1在烟草细胞中的共定位 | 第37-42页 |
| 3.1 实验材料 | 第37页 |
| 3.1.1 菌株与质粒 | 第37页 |
| 3.1.2 试剂与仪器 | 第37页 |
| 3.2 瞬时表达载体PYBA1132-Nbnrp1的构建 | 第37-39页 |
| 3.3 Nbnrp1和PevD1在烟草植株细胞中的瞬时表达 | 第39页 |
| 3.3.1 将重组质粒pYBA1132-Nbnrp1转化到农杆菌GV3101中 | 第39页 |
| 3.3.2 农杆菌渗入法转化烟草 | 第39页 |
| 3.4 结果与分析 | 第39-41页 |
| 3.4.1 成功构建瞬时表达载体pYBA1132-Nbnrp1 | 第39-40页 |
| 3.4.2 Nbnrp1蛋白与PevD1蛋白在烟草细胞中的共定位 | 第40-41页 |
| 3.5 讨论与小结 | 第41-42页 |
| 第四章 通过Nbnrp1过表达烟草研究Nbnrp1的功能 | 第42-56页 |
| 4.1 实验材料 | 第42页 |
| 4.1.1 菌株材料 | 第42页 |
| 4.1.2 实验试剂和仪器 | 第42页 |
| 4.2 植物表达载体pBI121-Nbnrp1的构建 | 第42-44页 |
| 4.3 农杆菌介导法转化本生烟 | 第44页 |
| 4.4 转基因烟草植株的分子检测 | 第44-47页 |
| 4.4.1 转基因烟草植株的PCR检测 | 第44-45页 |
| 4.4.2 转基因烟草Southern blot检测 | 第45-47页 |
| 4.5 Nbnrp1过表达烟草植株抗病分析 | 第47-49页 |
| 4.5.1 Nbnrp1过表达植株与野生型植株对PevD1诱导的HR研究 | 第47-48页 |
| 4.5.2 PevD1诱导的Nbnrp1过表达植株的抗病性研究 | 第48-49页 |
| 4.6 结果与分析 | 第49-55页 |
| 4.6.1 植物表达载体pBI121-Nbnrp1构建 | 第49-50页 |
| 4.6.2 农杆菌诱导的转基因本生烟 | 第50-51页 |
| 4.6.3 转基因本生烟的PCR检测 | 第51-52页 |
| 4.6.4 阳性转基因烟草Southern Blot检测 | 第52页 |
| 4.6.5 Nbnrp1过表达烟草植株抗病分析 | 第52-55页 |
| 4.7 讨论与小结 | 第55-56页 |
| 第五章 通过Nbnrp1沉默烟草研究Nbnrp1的功能 | 第56-68页 |
| 5.1 实验材料 | 第56页 |
| 5.1.1 菌株材料 | 第56页 |
| 5.1.2 实验试剂和仪器 | 第56页 |
| 5.2 植物表达干扰载体的构建 | 第56-57页 |
| 5.2.1 Nbnrp1基因干扰片段的选取 | 第56页 |
| 5.2.2 Nbnrp1干扰中间载体的构建 | 第56-57页 |
| 5.2.3 构建植物表达载体(pCAMBIA-RNAi-Nbnrp1) | 第57页 |
| 5.3 农杆菌介导法转化本生烟 | 第57页 |
| 5.4 转基因烟草植株的分子检测 | 第57-58页 |
| 5.4.1 转基因烟草植株的PCR检测 | 第57-58页 |
| 5.4.2 转基因烟草沉默效率的检测 | 第58页 |
| 5.5 Nbnrp1基因沉默烟草植株的抗病分析 | 第58页 |
| 5.5.1 Nbnrp1基因沉默植株与野生型植株对PevD1诱导的HR研究 | 第58页 |
| 5.5.2 Nbnrp1基因沉默植株与野生型植株对PevD1诱导的抗病性研究 | 第58页 |
| 5.6 结果与分析 | 第58-67页 |
| 5.6.1 Nbnrp1沉默片段的选择 | 第58-59页 |
| 5.6.2 植物转基因干扰表达载体(pCAMBIA-RNAi-Nbnrp1)的构建 | 第59-62页 |
| 5.6.3 农杆菌诱导的转基因本生烟 | 第62页 |
| 5.6.4 转基因本生烟的分子检测 | 第62-64页 |
| 5.6.5 Nbnrp1基因沉默烟草植株抗病分析 | 第64-67页 |
| 5.7 讨论与小结 | 第67-68页 |
| 第六章 全文结论 | 第68-69页 |
| 参考文献 | 第69-75页 |
| 附录 | 第75-77页 |
| 致谢 | 第77-78页 |
| 作者简历 | 第78页 |
