| 摘要 | 第4-5页 |
| Abstract | 第5页 |
| 1 前言 | 第9-18页 |
| 1.1 甘薯基因工程育种 | 第9-10页 |
| 1.2 甘薯遗传转化研究进展 | 第10-11页 |
| 1.2.1 基因枪法 | 第10页 |
| 1.2.2 电击法 | 第10页 |
| 1.2.3 发根农杆菌介导法 | 第10页 |
| 1.2.4 根癌农杆菌介导法 | 第10-11页 |
| 1.3 转基因研究现状 | 第11-14页 |
| 1.3.1 转基因作物 | 第11-13页 |
| 1.3.2 抗除草剂转基因作物 | 第13页 |
| 1.3.3 抗除草剂基因 | 第13-14页 |
| 1.4 草甘膦及抗草甘膦转基因研究进展 | 第14-17页 |
| 1.4.1 草甘膦概述 | 第14-15页 |
| 1.4.2 草甘膦作用机理 | 第15页 |
| 1.4.3 抗草甘膦作物的获得策略 | 第15-17页 |
| 1.4.4 抗草甘膦作物研究 | 第17页 |
| 1.5 本研究的目的和意义 | 第17页 |
| 1.6 本研究的创新点 | 第17-18页 |
| 2 材料和方法 | 第18-23页 |
| 2.1 材料 | 第18页 |
| 2.1.1 菌株和载体 | 第18页 |
| 2.1.2 植物受体 | 第18页 |
| 2.1.3 主要试剂 | 第18页 |
| 2.2 TA克隆 | 第18-20页 |
| 2.2.1 引物设计与合成 | 第18-19页 |
| 2.2.2 CP4-EPSPS基因扩增 | 第19页 |
| 2.2.3 CP4-EPSPS基因目的片段回收 | 第19页 |
| 2.2.4 CP4-EPSPS基因片段和pMD18-T连接 | 第19-20页 |
| 2.2.5 pMD18-T-CP4-EPSPS克隆载体鉴定 | 第20页 |
| 2.3 pCAMBIA1301-CP4-EPSPS表达载体构建 | 第20-21页 |
| 2.3.1 pMD18-T-CP4-EPSPS载体和pCAMBIA1301载体酶切 | 第20页 |
| 2.3.2 酶切后CP4-EPSPS基因和pCAMBIA1301载体回收 | 第20页 |
| 2.3.3 CP4-EPSPS基因和pCAMBIA1301载体连接 | 第20页 |
| 2.3.4 pCAMBIA1301-CP4-EPSPS载体菌液PCR鉴定 | 第20-21页 |
| 2.3.5 pCAMBIA1301-CP4-EPSPS载体酶切鉴定 | 第21页 |
| 2.4 pCAMBIA1301-CP4-EPSPS载体转化农杆菌 | 第21-22页 |
| 2.4.1 pCAMBIA1301-CP4-EPSPS载体转入EHA105 | 第21-22页 |
| 2.4.2 pCAMBIA1301-CP4-EPSPS载体菌液PCR鉴定 | 第22页 |
| 2.5 甘薯茎段遗传转化 | 第22页 |
| 2.5.1 甘薯茎段和侵染菌液制备 | 第22页 |
| 2.5.2 农杆菌侵染甘薯茎段 | 第22页 |
| 2.5.3 甘薯茎段共培养 | 第22页 |
| 2.5.4 甘薯茎段的抑菌及移栽 | 第22页 |
| 2.6 非转基因甘薯草甘膦耐受性检测 | 第22页 |
| 2.7 转基因甘薯鉴定 | 第22-23页 |
| 3 结果与分析 | 第23-31页 |
| 3.1 CP4-EPSPS基因的获得 | 第23-24页 |
| 3.1.1 目的基因的扩增 | 第23页 |
| 3.1.2 pMD18-T-CP4-EPSPS质粒PCR | 第23-24页 |
| 3.1.3 序列比对 | 第24页 |
| 3.2 pCAMBIA1301-CP4-EPSPS载体构建 | 第24-26页 |
| 3.2.1 pCAMBIA1301-CP4-EPSPS重组载体PCR鉴定 | 第24-25页 |
| 3.2.2 pCAMBIA1301-CP4-EPSPS重组载体酶切鉴定 | 第25-26页 |
| 3.3 pCAMBIA1301-CP4-EPSPS重组载体转化农杆菌PCR鉴定 | 第26-27页 |
| 3.4 非转基因甘薯耐受性分析 | 第27页 |
| 3.5 转基因甘薯检测 | 第27-31页 |
| 3.5.1 转基因甘薯PCR鉴定 | 第27-29页 |
| 3.5.2 转基因甘薯草甘膦抗性鉴定 | 第29-31页 |
| 4 结论与讨论 | 第31-33页 |
| 4.1 讨论 | 第31-32页 |
| 4.1.1 不同外植体对遗传转化的影响 | 第31页 |
| 4.1.2 基因型对转化的影响 | 第31-32页 |
| 4.2 结论 | 第32页 |
| 4.3 后续试验 | 第32-33页 |
| 参考文献 | 第33-40页 |
| 附录 | 第40-47页 |
| 致谢 | 第47-48页 |
| 作者简介 | 第48-49页 |
| 导师简介 | 第49页 |
