| 摘要 | 第5-7页 |
| ABSTRACT | 第7-8页 |
| 第一章 文献综述 | 第13-25页 |
| 1.1 灵杆菌核酸酶的研究进展 | 第13-17页 |
| 1.1.1 灵杆菌核酸酶的研究 | 第13-15页 |
| 1.1.2 灵杆菌核酸酶的理化性质 | 第15-16页 |
| 1.1.3 灵杆菌核酸酶的应用 | 第16-17页 |
| 1.2 链霉亲和素与Strep tag II的研究进展 | 第17-21页 |
| 1.2.1 Strep tag II与链霉亲和素 | 第17-18页 |
| 1.2.2 Strep tag II的研究 | 第18-19页 |
| 1.2.3 链霉亲和素的研究 | 第19-21页 |
| 1.3 包涵体的研究进展 | 第21-23页 |
| 1.3.1 包涵体的形成 | 第21-22页 |
| 1.3.2 包涵体的纯化 | 第22页 |
| 1.3.3 包涵体的溶解 | 第22-23页 |
| 1.3.4 包涵体的复性 | 第23页 |
| 1.4 选题的目的、意义与技术路线 | 第23-25页 |
| 1.4.1 选题的目的、意义 | 第23-24页 |
| 1.4.2 技术路线 | 第24-25页 |
| 第二章 融合Strep tag II的灵杆菌核酸酶的重组表达与纯化 | 第25-37页 |
| 2.1 实验材料 | 第25-27页 |
| 2.1.1 质粒与菌株 | 第25页 |
| 2.1.2 工具酶及试剂 | 第25-27页 |
| 2.1.3 主要仪器 | 第27页 |
| 2.2 实验方法 | 第27-31页 |
| 2.2.1 引物设计 | 第27页 |
| 2.2.2 目的基因的扩增 | 第27-28页 |
| 2.2.3 目的基因与载体的酶切 | 第28-29页 |
| 2.2.4 目的基因与载体连接 | 第29页 |
| 2.2.5 连接产物的转化 | 第29-30页 |
| 2.2.6 重组质粒的检测 | 第30页 |
| 2.2.7 重组质粒的再构建 | 第30页 |
| 2.2.8 融合蛋白的诱导表达 | 第30页 |
| 2.2.9 融合蛋白的可溶性分析 | 第30页 |
| 2.2.10 融合蛋白包涵体的纯化 | 第30-31页 |
| 2.2.11 包涵体的溶解与复性 | 第31页 |
| 2.2.12 离子交换层析纯化目标蛋白 | 第31页 |
| 2.2.13 纯化融合蛋白的保存 | 第31页 |
| 2.3 实验结果 | 第31-35页 |
| 2.3.1 目的基因的扩增 | 第31-32页 |
| 2.3.2 重组质粒的检测 | 第32-33页 |
| 2.3.3 融合蛋白的诱导表达及可溶性分析 | 第33-35页 |
| 2.3.4 融合蛋白包涵体的纯化 | 第35页 |
| 2.3.5 融合蛋白的复性与纯化 | 第35页 |
| 2.4 讨论 | 第35-37页 |
| 第三章 融合Strep tag II标签的灵杆菌核酸酶的活性分析 | 第37-44页 |
| 3.1 实验材料 | 第37-38页 |
| 3.1.1 实验材料 | 第37页 |
| 3.1.2 主要试剂 | 第37-38页 |
| 3.2 实验方法 | 第38-39页 |
| 3.2.1 酶活力的测定 | 第38页 |
| 3.2.2 温度对酶活力的影响 | 第38页 |
| 3.2.3 pH对酶活力的影响 | 第38页 |
| 3.2.4 MgC l2浓度对酶活力的影响 | 第38页 |
| 3.2.5 EDTA对酶活力的影响 | 第38页 |
| 3.2.6 尿素浓度对酶活力的影响 | 第38-39页 |
| 3.2.7 不同金属离子对酶活力的影响 | 第39页 |
| 3.3 实验结果 | 第39-42页 |
| 3.3.1 酶活力单位的确定 | 第39页 |
| 3.3.2 温度对酶活力的影响 | 第39-40页 |
| 3.3.3 pH对酶活力的影响 | 第40页 |
| 3.3.4 MgC l2浓度对酶活力的影响 | 第40-41页 |
| 3.3.5 EDTA、尿素对酶活力的影响 | 第41-42页 |
| 3.3.6 不同金属离子对酶活力的影响 | 第42页 |
| 3.4 讨论 | 第42-44页 |
| 第四章 链霉亲合素的重组表达与纯化 | 第44-53页 |
| 4.1 实验材料 | 第44-45页 |
| 4.1.1 表达载体及菌株 | 第44页 |
| 4.1.2 工具酶及试剂 | 第44-45页 |
| 4.2 实验方法 | 第45-48页 |
| 4.2.1 链霉亲和素表达载体的构建 | 第45-46页 |
| 4.2.2 链霉亲和素基因的定点突变 | 第46-47页 |
| 4.2.3 链霉亲和素突变体的诱导表达以及可溶性分析 | 第47页 |
| 4.2.4 链霉亲和素突变体包涵体的分离纯化 | 第47页 |
| 4.2.5 链霉亲和素突变体包涵体的溶解与复性 | 第47-48页 |
| 4.3 实验结果 | 第48-52页 |
| 4.3.1 链霉亲和素重组表达载体的构建 | 第48页 |
| 4.3.2 链霉亲和素基因定点突变PCR结果 | 第48页 |
| 4.3.3 链霉亲和素基因定点突变测序结果 | 第48-49页 |
| 4.3.4 链霉亲和素突变体的诱导表达以及可溶性分析 | 第49-50页 |
| 4.3.5 链霉亲和素突变体包涵体的分离纯化 | 第50页 |
| 4.3.6 链霉亲和素突变体包涵体的溶解与复性 | 第50-52页 |
| 4.4 讨论 | 第52-53页 |
| 第五章 链霉亲和素突变体琼脂糖柱的制备以及去除重组核酸酶效果的检测 | 第53-57页 |
| 5.1 实验材料 | 第53页 |
| 5.1.1 主要材料 | 第53页 |
| 5.1.2 主要试剂 | 第53页 |
| 5.2 实验方法 | 第53-55页 |
| 5.2.1 链霉亲和素琼脂糖层析柱的制备 | 第53-54页 |
| 5.2.2 重组核酸酶去除效果检测 | 第54-55页 |
| 5.3 实验结果 | 第55-56页 |
| 5.3.1 链霉亲和素与Sepharose C L 6B的结合率的测定 | 第55页 |
| 5.3.2 Omp A分泌信号肽的切除 | 第55页 |
| 5.3.3 重组核酸酶的去除效果检测 | 第55-56页 |
| 5.4 讨论 | 第56-57页 |
| 第六章 结论 | 第57-58页 |
| 参考文献 | 第58-65页 |
| 附录 | 第65-69页 |
| 附录 1：pLLP-OmpA载体图谱 | 第65-66页 |
| 附录 2：pET28a载体图谱 | 第66-67页 |
| 附录 3：灵杆菌核酸酶序列 | 第67页 |
| 附录 4：链霉亲和素序列 | 第67-69页 |
| 缩略词表 | 第69-70页 |
| 致谢 | 第70-71页 |
| 作者简介 | 第71页 |
