| 致谢 | 第4-7页 |
| 摘要 | 第7-8页 |
| 1 文献综述 | 第8-16页 |
| 1.1 酶热传感器的工作原理 | 第8页 |
| 1.2 酶热传感器研究历史 | 第8-10页 |
| 1.2.1 简单系统 | 第8-9页 |
| 1.2.2 经典系统 | 第9页 |
| 1.2.3 小型系统 | 第9-10页 |
| 1.2.4 微型系统 | 第10页 |
| 1.2.5 杂合型系统 | 第10页 |
| 1.3 酶热传感器的应用 | 第10-11页 |
| 1.3.1 临床应用 | 第11页 |
| 1.3.2 工业发酵分析和过程控制 | 第11页 |
| 1.3.3 酶活检测 | 第11页 |
| 1.3.4 环境监测 | 第11页 |
| 1.4 酶热传感器的优势 | 第11-12页 |
| 1.5 Ⅱ型糖尿病与游离脂肪酸 | 第12-13页 |
| 1.5.1 FFA与胰岛素抵抗 | 第12-13页 |
| 1.5.2 FFA与p细胞分泌缺陷 | 第13页 |
| 1.6 FFA的检测意义及方法 | 第13页 |
| 1.7 铜绿假单胞菌长链脂酞辅酶A合成酶的特异性 | 第13-14页 |
| 1.8 粉纹夜蛾颗粒体病毒增效蛋白 | 第14-16页 |
| 1.8.1 ENHANCIN的分子特征 | 第14页 |
| 1.8.2 ENHANCIN的作用机制 | 第14-16页 |
| 2 引言 | 第16-17页 |
| 3 材料与方法 | 第17-25页 |
| 3.1 材料 | 第17-20页 |
| 3.1.1 菌株与载体 | 第17页 |
| 3.1.2 引物 | 第17页 |
| 3.1.3 酶和其它试剂 | 第17-18页 |
| 3.1.4 主要溶液 | 第18-20页 |
| 3.1.5 仪器 | 第20页 |
| 3.2 方法 | 第20-25页 |
| 3.2.1 pET-32a(+)/fadD1原核表达载体的构建和鉴定 | 第20-21页 |
| 3.2.2 FadD1的原核表达 | 第21页 |
| 3.2.3 FadD1的Western blot验证 | 第21-22页 |
| 3.2.4 FadD1的纯化 | 第22页 |
| 3.2.5 FadD1的体外活性测定 | 第22-23页 |
| 3.2.6 FadD1的固定化与传感器的组装 | 第23页 |
| 3.2.7 酶热传感器的调试与检测 | 第23-24页 |
| 3.2.7.1 进样条件优化 | 第23页 |
| 3.2.7.2 底物的电压响应检测 | 第23-24页 |
| 3.2.8 Tn-En的原核表达载体构建 | 第24页 |
| 3.2.9 Tn-En的原核表达 | 第24页 |
| 3.2.10 Tn-En的纯化 | 第24-25页 |
| 3.2.11 Tn-En的复性 | 第25页 |
| 3.2.12 Tn-En与围食膜的体外酶解 | 第25页 |
| 4 结果与分析 | 第25-40页 |
| 4.1 PAO1基因组提取 | 第25-26页 |
| 4.2 fadD1的PCR扩增 | 第26页 |
| 4.3 fadD1的重组克隆载体的构建 | 第26-28页 |
| 4.4 fadD1的重组表达载体的酶切验证 | 第28页 |
| 4.5 FadD1的表达及Western Blot验证 | 第28页 |
| 4.6 FadD1的纯化 | 第28-29页 |
| 4.7 FadD1的活性检测 | 第29-30页 |
| 4.8 FadD1的固定化及酶热传感器的组装 | 第30-31页 |
| 4.9 酶热传感器的调试与检测 | 第31-33页 |
| 4.10 底物的电压响应检测 | 第33-35页 |
| 4.11 TN-En的重组表达载体的酶切验证 | 第35-37页 |
| 4.12 Tn-En的原核表达 | 第37页 |
| 4.13 Tn-En的纯化 | 第37-38页 |
| 4.14 Tn-En的复性 | 第38-39页 |
| 4.15 Tn-En与围食膜的体外孵育 | 第39-40页 |
| 5 讨论 | 第40-42页 |
| 参考文献 | 第42-47页 |
| Abstract | 第47页 |
