| 摘要 | 第4-5页 |
| Abstract | 第5-6页 |
| 1 引言 | 第10-19页 |
| 1.1 转录组测序(RNA-seq)技术及其应用研究进展 | 第10-12页 |
| 1.1.1 转录组及RNA-seq概述 | 第10页 |
| 1.1.2 转录组测序技术应用研究进展 | 第10-12页 |
| 1.1.3 荔枝转录组研究进展 | 第12页 |
| 1.2 启动子分类及研究进展 | 第12-15页 |
| 1.2.1 组成型启动子 | 第12-13页 |
| 1.2.2 诱导型启动子 | 第13页 |
| 1.2.3 组织特异性启动子 | 第13-15页 |
| 1.3 荔枝基因及启动子研究进展 | 第15-16页 |
| 1.3.1 荔枝基因研究进展 | 第15页 |
| 1.3.2 荔枝基因启动子研究进展 | 第15-16页 |
| 1.4 转基因转化方法的研究进展 | 第16-17页 |
| 1.4.1 基因枪法 | 第16页 |
| 1.4.2 农杆菌介导法 | 第16-17页 |
| 1.4.3 花粉管通道法 | 第17页 |
| 1.5 研究目的及意义 | 第17-18页 |
| 1.6 研究内容 | 第18-19页 |
| 2 材料与基本实验操作 | 第19-21页 |
| 2.1 材料、试剂与仪器 | 第19-21页 |
| 2.1.1 植物材料 | 第19页 |
| 2.1.2 转录组数据获得及分析 | 第19页 |
| 2.1.3 克隆载体和实验菌株 | 第19页 |
| 2.1.4 酶和试剂 | 第19-20页 |
| 2.1.5 引物合成及测序 | 第20页 |
| 2.1.6 实验仪器 | 第20页 |
| 2.1.7 试剂配制 | 第20-21页 |
| 3 方法 | 第21-35页 |
| 3.1 转录组数据分析 | 第21页 |
| 3.2 实时荧光定量PCR验证 | 第21-27页 |
| 3.2.1 荧光定量PCR引物设计 | 第22页 |
| 3.2.2 荔枝RNA提取 | 第22-23页 |
| 3.2.3 cDNA第一链的合成 | 第23-24页 |
| 3.2.4 PCR克隆组织特异表达基因 | 第24页 |
| 3.2.5 PCR产物回收 | 第24-25页 |
| 3.2.6 回收产物连接和转化 | 第25页 |
| 3.2.7 提取质粒 | 第25-26页 |
| 3.2.8 实时荧光定量PCR标准品的构建方法 | 第26页 |
| 3.2.9 实时荧光定量PCR(RT-PCR)反应 | 第26-27页 |
| 3.3 启动子克隆与植物表达载体的构建 | 第27-30页 |
| 3.3.1 提取荔枝基因组DNA(改良CTAB法) | 第27页 |
| 3.3.2 启动子及LcTLP基因克隆 | 第27-28页 |
| 3.3.3 表达载体的构建 | 第28-30页 |
| 3.3.4 连接目的片段 | 第30页 |
| 3.3.5 酶切验证 | 第30页 |
| 3.4 基因枪瞬时表达验证 | 第30-32页 |
| 3.4.1 质粒提取 | 第30-31页 |
| 3.4.2 微弹制备 | 第31页 |
| 3.4.3 基因枪轰击材料 | 第31页 |
| 3.4.4 GUS组织化学染色 | 第31-32页 |
| 3.5 表达载体通过农杆菌介导花粉管侵入法转化荔枝 | 第32-35页 |
| 3.5.1 制备农杆菌感受态 | 第32页 |
| 3.5.2 冻融法转化农杆菌 | 第32页 |
| 3.5.3 花粉管导入法 | 第32-33页 |
| 3.5.4 实验操作 | 第33页 |
| 3.5.5 转基因植株的检测 | 第33-35页 |
| 4 结果与分析 | 第35-61页 |
| 4.1 转录组分析结果 | 第35-46页 |
| 4.1.1 表达分析 | 第35-36页 |
| 4.1.2 GO分析和KEGG分析结果 | 第36-46页 |
| 4.2 实时荧光定量PCR检测结果 | 第46-50页 |
| 4.2.1 荔枝各组织RNA的提取以及反转录检测 | 第46-47页 |
| 4.2.2 RT-PCR引物的溶解曲线分析 | 第47-48页 |
| 4.2.3 标准曲线绘制 | 第48-49页 |
| 4.2.4 九个基因在荔枝不同组织中的表达 | 第49-50页 |
| 4.3 荔枝LcFKBP16-2与LcGRX基因的生物信息学分析 | 第50-51页 |
| 4.4 启动子及LcTLP基因克隆 | 第51页 |
| 4.5 启动子序列调控元件分析 | 第51-56页 |
| 4.6 植物表达载体的构建 | 第56页 |
| 4.7 基因枪瞬时检测 | 第56-57页 |
| 4.8 花粉管导入法阳性植株检测 | 第57-61页 |
| 5 讨论 | 第61-63页 |
| 5.1 关于组织特异表达基因功能和代谢通路分析 | 第61页 |
| 5.2 启动子结构元件与功能的关系 | 第61页 |
| 5.3 荔枝转基因转化方法的研究 | 第61-63页 |
| 6 结论 | 第63-64页 |
| 参考文献 | 第64-69页 |
| 缩略语表 | 第69-70页 |
| 致谢 | 第70页 |
