| 摘要 | 第7-9页 |
| Abstract | 第9-10页 |
| 缩略语表(Abbreviations) | 第11-13页 |
| 1 文献综述 | 第13-25页 |
| 1.1 研究问题的由来 | 第13-14页 |
| 1.2 miRNA及其研究进展 | 第14-20页 |
| 1.2.1 miRNA的形成过程及作用机制 | 第14-15页 |
| 1.2.2 miRNA参与调控炎症反应 | 第15-17页 |
| 1.2.3 miRNA在血管生成中的作用 | 第17-18页 |
| 1.2.4 miRNA在斑马鱼中的研究进展 | 第18-20页 |
| 1.3 miR-22研究进展 | 第20-21页 |
| 1.3.1 miR-22基因简介 | 第20页 |
| 1.3.2 miR-22在肿瘤方面的研究 | 第20页 |
| 1.3.3 miR-22的其他生物学功能 | 第20-21页 |
| 1.4 VE-cadherin的功能及研究进展 | 第21-24页 |
| 1.4.1 血管内皮屏障功能 | 第21-22页 |
| 1.4.2 VE-cadherin在炎症中的调节作用 | 第22-23页 |
| 1.4.3 VE-cadherin在血管发生中的作用 | 第23-24页 |
| 1.5 研究目的与意义 | 第24-25页 |
| 2 试验材料 | 第25-30页 |
| 2.1 引物以及相关核苷酸序列 | 第25-27页 |
| 2.2 实验动物、组织、细胞、菌株和质粒 | 第27页 |
| 2.3 主要药品及试剂 | 第27-28页 |
| 2.4 主要培养基、缓冲液及其配制 | 第28-30页 |
| 3 实验方法 | 第30-40页 |
| 3.1 细胞培养 | 第30页 |
| 3.2 总RNA的提取 | 第30页 |
| 3.3 聚合酶链式反应(PCR) | 第30-31页 |
| 3.4 反转录(RT-PCR) | 第31-32页 |
| 3.4.1 反转录体系及程序 | 第31-32页 |
| 3.4.2 miRNA反转录体系及程序 | 第32页 |
| 3.5 荧光定量PCR (qPCR) | 第32-33页 |
| 3.6 蛋白质印迹技术 (Western blot) | 第33-35页 |
| 3.6.1 细胞总蛋白的提取及浓度测定 | 第33页 |
| 3.6.2 SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳 | 第33-34页 |
| 3.6.3 转膜 | 第34页 |
| 3.6.4 封闭 | 第34页 |
| 3.6.5 抗体的杂交 | 第34-35页 |
| 3.7 细胞转染 | 第35页 |
| 3.8 Poly(I:C)刺激实验 | 第35页 |
| 3.9 MTT法检测细胞活性 | 第35-36页 |
| 3.10 MPO活性检测实验 | 第36页 |
| 3.11 胚胎显微注射 | 第36页 |
| 3.12 整体原位杂交(whole-mount in situ hybridization) | 第36-37页 |
| 3.13 靶基因预测 | 第37页 |
| 3.14 荧光素酶报告实验 | 第37-39页 |
| 3.14.1 野生型荧光素酶报告载体的构建 | 第37-38页 |
| 3.14.2 突变型荧光素酶报告载体的构建 | 第38-39页 |
| 3.14.3 重组质粒与模拟物或者抑制剂共转染HUVECs细胞 | 第39页 |
| 3.14.4 双荧光素酶活性检测分析 | 第39页 |
| 3.15 数据统计 | 第39-40页 |
| 4 结果分析 | 第40-58页 |
| 4.1 miR-22靶基因预测及鉴定 | 第40-43页 |
| 4.1.1 miR-22靶基因预测 | 第40页 |
| 4.1.2 miR-22靶基因鉴定 | 第40-43页 |
| 4.2 过表达miR-22对VE-cadherin表达的影响 | 第43-45页 |
| 4.2.1 qPCR检测miR-22对VE-cadherin mRNA表达的影响 | 第43-44页 |
| 4.2.2 Western Blot检测miR-22对VE-cadherin蛋白表达的影响 | 第44-45页 |
| 4.3 miR-22参与调控血管内皮炎症反应 | 第45-49页 |
| 4.3.1 qPCR检测猪肺组织中miR-22和VE-cadherin的表达 | 第45-46页 |
| 4.3.2 Poly(I:C)刺激HUVECs，qPCR检测miR-22和VE-cadherin的表达 | 第46-47页 |
| 4.3.3 qPCR检测过表达miR-22对HUVECs细胞炎性因子表达的影响 | 第47页 |
| 4.3.4 MTT实验检测过表达miR-22对细胞增殖的影响 | 第47-48页 |
| 4.3.5 qPCR检测过表达miR-22对小鼠肺组织中炎性因子表达的影响 | 第48-49页 |
| 4.3.6 miR-22过表达对小鼠肺组织MPO活性的影响 | 第49页 |
| 4.4 miR-22过表达对斑马鱼血管发育的影响 | 第49-55页 |
| 4.4.1 qPCR检测斑马鱼胚胎发育时期miR-22的时空表达特性 | 第49-50页 |
| 4.4.2 miR-22过表达对斑马鱼发育的形态学影响 | 第50-51页 |
| 4.4.3 qPCR检测miR-22过表达对斑马鱼VE-cadherin表达的影响 | 第51-52页 |
| 4.4.4 Western Blot检测miR-22过表达对斑马鱼VE-cadherin表达的影响 | 第52页 |
| 4.4.5 荧光显微镜观察miR-22过表达对斑马鱼血管发育的影响 | 第52-53页 |
| 4.4.6 整体原位杂交检测miR-22对血管标记基因fli1表达的影响 | 第53-54页 |
| 4.4.7 qPCR检测miR-22过表达对斑马鱼血管标志基因表达的影响 | 第54-55页 |
| 4.5 外源注射VE-cadherin mRNA对斑马鱼血管发育的补偿作用 | 第55-58页 |
| 4.5.1 荧光显微镜观察VE-cadherin的mRNA对斑马鱼血管发育的影响 | 第55-56页 |
| 4.5.2 整体原位杂交检测VE-cadherin对fli1表达的影响 | 第56-57页 |
| 4.5.3 qPCR检测VE-cadherin对斑马鱼血管标志基因表达的影响 | 第57-58页 |
| 5 讨论 | 第58-61页 |
| 5.1 miR-22靶基因的预测及验证 | 第58-59页 |
| 5.2 miR-22参与调控炎症反应 | 第59-60页 |
| 5.3 miR-22抑制VE-cadherin的表达影响斑马鱼血管发育 | 第60-61页 |
| 6 本研究得出的主要结论 | 第61-62页 |
| 参考文献 | 第62-70页 |
| 致谢 | 第70页 |
