| 摘要 | 第4-5页 |
| ABSTRACT | 第5-6页 |
| 第一章 前言 | 第9-20页 |
| 1.1 板栗疫病菌与低毒病毒 | 第9-13页 |
| 1.1.1 板栗疫病和板栗疫病菌 | 第9-10页 |
| 1.1.2 低毒力现象和低毒病毒 | 第10-11页 |
| 1.1.3 板栗疫病菌与低毒病毒互作模式 | 第11页 |
| 1.1.4 板栗疫病的防治 | 第11-12页 |
| 1.1.5 板栗疫病菌分子生物学技术背景 | 第12-13页 |
| 1.2 丝状真菌分泌模式研究现状 | 第13-14页 |
| 1.3 丝状真菌经典分泌模式 | 第14-16页 |
| 1.3.1 内质网 | 第14页 |
| 1.3.2 高尔基体 | 第14-15页 |
| 1.3.3 液泡 | 第15页 |
| 1.3.4 内涵体 | 第15-16页 |
| 1.4 丝状真菌非经典分泌模式 | 第16-18页 |
| 1.4.1 液泡与质膜融合介导 | 第16-17页 |
| 1.4.2 高尔基体旁路 | 第17页 |
| 1.4.3 多泡体介导 | 第17页 |
| 1.4.4 经双层膜细胞器EXPO | 第17-18页 |
| 1.5 自噬 | 第18-19页 |
| 1.6 本研究目的与意义 | 第19-20页 |
| 第二章 材料与方法 | 第20-28页 |
| 2.1 材料 | 第20-21页 |
| 2.1.1 菌种 | 第20-21页 |
| 2.1.2 质粒 | 第21页 |
| 2.1.3 抗生素及其使用浓度 | 第21页 |
| 2.2 PCR扩增 | 第21-23页 |
| 2.2.1 引物 | 第21-23页 |
| 2.2.2 PCR体系和程序 | 第23页 |
| 2.3 分泌蛋白样品制备 | 第23页 |
| 2.4 Bradford法测定蛋白浓度 | 第23-24页 |
| 2.4.1 绘制蛋白标曲 | 第23-24页 |
| 2.4.2 测定蛋白浓度 | 第24页 |
| 2.5 iTRAQ测定分泌蛋白组差异 | 第24-25页 |
| 2.5.1 样品预处理 | 第24-25页 |
| 2.5.2 预实验 | 第25页 |
| 2.5.3 分馏及回收 | 第25页 |
| 2.5.4 上机 | 第25页 |
| 2.6 同源重组敲除目的基因 | 第25-27页 |
| 2.6.1 细菌转化 | 第26页 |
| 2.6.2 质粒提取 | 第26页 |
| 2.6.3 外源DNA制备 | 第26页 |
| 2.6.4 DNA片段的纯化回收 | 第26页 |
| 2.6.5 融合PCR | 第26页 |
| 2.6.6 真菌原生质体制备 | 第26页 |
| 2.6.7 真菌转化 | 第26-27页 |
| 2.6.8 突变株的筛选纯化 | 第27页 |
| 2.7 实时荧光定量PCR(qRT-PCR) | 第27-28页 |
| 2.7.1 板栗疫病菌总RNA提取 | 第27页 |
| 2.7.2 cDNA的制备 | 第27页 |
| 2.7.3 基因表达量的测定 | 第27-28页 |
| 第三章 结果与分析 | 第28-46页 |
| 3.1 分泌蛋白提取的质量 | 第28-29页 |
| 3.1.1 分泌蛋白定性分析 | 第28页 |
| 3.1.2 定量分析 | 第28-29页 |
| 3.2 病毒侵染对分泌蛋白的影响 | 第29-41页 |
| 3.2.1 菌株EP713差异蛋白数据及分析 | 第30-34页 |
| 3.2.2 菌株Euro7差异蛋白数据及分析 | 第34-37页 |
| 3.2.3 菌株P29差异蛋白数据及分析 | 第37-40页 |
| 3.2.4 不同病毒或病毒蛋白对分泌蛋白组影响的差异 | 第40-41页 |
| 3.3 mRNA表达量与蛋白表达的相关性 | 第41-42页 |
| 3.4 五个差异表达蛋白的基因功能研究 | 第42-46页 |
| 3.4.1 敲除株的验证 | 第42-43页 |
| 3.4.2 基因敲除株的表型、生长速率及产孢 | 第43-45页 |
| 3.4.3 敲除株的致病力检测 | 第45-46页 |
| 第四章 讨论 | 第46-49页 |
| 第五章 结论与展望 | 第49-50页 |
| 5.1 结论 | 第49页 |
| 5.2 展望 | 第49-50页 |
| 参考文献 | 第50-61页 |
| 附录 | 第61-67页 |
| 附录A 培养基及相关溶液 | 第61-64页 |
| 附录B 常规分子生物学操作 | 第64-67页 |
| 附表 | 第67-149页 |
| 致谢 | 第149-150页 |
| 攻读硕士学位期间发表论文情况 | 第150页 |