| 摘要 | 第5-8页 |
| abstract | 第8-11页 |
| 第一章 绪论 | 第15-32页 |
| 1.1 帕金森病简介 | 第15页 |
| 1.2 α-突触核蛋白(α-SYN )简介 | 第15-17页 |
| 1.2.1 α-syn遗传学性质 | 第15-16页 |
| 1.2.2 α-syn的生物化学性质 | 第16页 |
| 1.2.3 α-syn的主要生理功能 | 第16页 |
| 1.2.4 病理状态下的α-syn | 第16-17页 |
| 1.2.5 α-syn的不同构象和毒性构象 | 第17页 |
| 1.2.6 导致α-syn蛋白寡聚体形成的途径 | 第17页 |
| 1.3 α-SYN蛋白的磷酸化 | 第17-24页 |
| 1.3.1 α-syn蛋白在丝氨酸129位的磷酸化 | 第18-20页 |
| 1.3.2 α-syn在丝氨酸87位的磷酸化 | 第20-21页 |
| 1.3.3 α-syn在酪氨酸125位的磷酸化 | 第21-22页 |
| 1.3.4 磷酸化的α-syn作为临床诊断生物标志物研究 | 第22-23页 |
| 1.3.5 在人脑组织样品中对磷酸化α-syn的检测 | 第23页 |
| 1.3.6 α-syn磷酸化应用策略讨论 | 第23-24页 |
| 1.4 多酚（-）-表没食子儿茶素没食子酸酯（EGCG）对α-SYN蛋白聚集的抑制作用 | 第24-26页 |
| 1.5 α-SYN蛋白质谱定量研究 | 第26-29页 |
| 1.5.1 质谱技术对α-syn的鉴定及定量 | 第28页 |
| 1.5.2 使用MRM-MS进行α-syn蛋白定量研究中的应用 | 第28-29页 |
| 本论文的研究目标及主要内容 | 第29-32页 |
| 第二章 -突触核蛋白PD-关联基因突变与SER129磷酸化对PD病理发生影响的研究 | 第32-74页 |
| 2.1 简介 | 第32-33页 |
| 2.2 材料与方法 | 第33-47页 |
| 2.2.1 试剂 | 第33-35页 |
| 2.2.2 质粒 | 第35页 |
| 2.2.3 引物 | 第35页 |
| 2.2.4 实验仪器(见表 2.1) | 第35-36页 |
| 2.2.5 实验方法 | 第36-47页 |
| 2.3 结果 | 第47-68页 |
| 2.3.1 α-syn PD-关联的基因突变及Ser129磷酸化双突变质粒构建及验证 | 第47-50页 |
| 2.3.2 流式细胞技术检测细胞凋亡 | 第50-54页 |
| 2.3.3 α-syn PD-关联的基因突变及Ser129磷酸化双突变质粒转染PC12细胞后对α-syn亚细胞定位影响 | 第54-56页 |
| 2.3.4 转入α-syn PD-关联的基因突变Ser129磷酸化双突变质粒对细胞内泛素途径蛋白表达影响 | 第56-58页 |
| 2.3.5 转入α-syn PD-关联的突变Ser129磷酸化双突变质粒对细胞内自噬途径蛋白表达影响 | 第58-62页 |
| 2.3.6 SNCα转基因小鼠纹状体与黑质中Ser129磷酸化免疫组化的对比 | 第62页 |
| 2.3.7 SNCα转基因小鼠纹状体与黑质中酪氨酸羟化酶（TH）表达水平免疫组化的比较结果 | 第62-63页 |
| 2.3.8 SNCα转基因小鼠纹状体与黑质中Ser129磷酸化的α-syn蛋白对不同蛋白降解途径的影响 | 第63-68页 |
| 2.4 讨论 | 第68-74页 |
| 2.4.1 α-syn PD-关联基因突变与Ser129磷酸化突变双突变质粒构建成功并在PC12细胞中成功表达 | 第69页 |
| 2.4.2 过表达WT及三种PD-关联基因突变 α-syn在Ser129磷酸化前后对PC12细胞凋亡有不同影响 | 第69-70页 |
| 2.4.3 过表达WT α-syn及三种α-syn PD-关联基因突变与α-syn Ser129磷酸化会影响α-syn蛋白亚细胞分布 | 第70页 |
| 2.4.4 过表达WT α-syn及三种α-syn PD-关联基因突变与α-synSer129磷酸化PC12细胞泛素蛋白酶体系统降解途径表现出不同的作用 | 第70-71页 |
| 2.4.5 过表达WT α-syn及三种α-syn PD-关联基因突变与α-syn Ser129磷酸化对PC12细胞在自噬降解途径表现出不同的作用 | 第71-72页 |
| 2.4.6 SNCα转基因小鼠的在体试验的结果提示 | 第72页 |
| 2.4.7 研究展望 | 第72-74页 |
| 第三章 α-syn及磷酸化α-syn聚集的小分子抑制剂表没食子儿茶素没食子酸酯（EGCG）作用研究 | 第74-105页 |
| 3.1 简介 | 第74-75页 |
| 3.2 材料与方法 | 第75-81页 |
| 3.2.1 试剂及耗材 | 第75页 |
| 3.2.2 蛋白的分离 | 第75-76页 |
| 3.2.3 蛋白的纯化 | 第76-77页 |
| 3.2.4 SDS-PαGE电泳 | 第77页 |
| 3.2.5 胶内酶解及质谱验证实验 | 第77-78页 |
| 3.2.6 α-syn聚集实验（Th T法） | 第78-79页 |
| 3.2.7 EGCG对α-syn聚集抑制实验(ThT法) | 第79页 |
| 3.2.8 EGCG对α-syn聚集抑制实验（EM法） | 第79页 |
| 3.2.9 标记的α-syn肽段与α-syn结合的示踪 | 第79页 |
| 3.2.10 ED50的测试 | 第79-80页 |
| 3.2.11 PD病人组织脑片检测 | 第80页 |
| 3.2.12 检测α-syn与EGCG结合实验 | 第80-81页 |
| 3.2.13 α-syn蛋白及α-syn α53T突变蛋白体外磷酸化方法 | 第81页 |
| 3.2.14 统计方法 | 第81页 |
| 3.3 结果 | 第81-102页 |
| 3.3.1 α-syn及α-synα53T突变蛋白的纯化 | 第81-85页 |
| 3.3.2 α-syn体外聚集规律实验 | 第85-87页 |
| 3.3.3 不同浓度EGCG在 1-8 天对α-syn蛋白体外聚集的影响 | 第87页 |
| 3.3.4 荧光分光光度计检测EGCG对体外α-syn聚集的抑制效果 | 第87-91页 |
| 3.3.5 EGCG对α-syn聚集抑制作用的半数有效量ED50 | 第91-92页 |
| 3.3.6 检测α-syn易于发生聚集的氨基酸位点及EGCG对其的抑制作用 | 第92-93页 |
| 3.3.7 EGCG与α-syn结合方式的探究 | 第93-95页 |
| 3.3.8 PD患者脑片中EGCG对α-syn蛋白聚集的抑制效果检测 | 第95-102页 |
| 3.4 讨论 | 第102-105页 |
| 3.4.1EGCG可以抑制α-syn的聚集，具有神经保护作用 | 第102-103页 |
| 3.4.2 EGCG可通过分子间非共价作用力阻塞某些特定的氨基酸区域来抑制α-syn的聚集 | 第103页 |
| 3.4.3 EGCG对α-syn α53T蛋白及磷酸化的α-syn α53T蛋白聚集的影响 | 第103-104页 |
| 3.4.4 EGCG作为神经退行性变小分子抑制剂治疗策略的展望 | 第104-105页 |
| 第四章 基于高效液相色谱-稳定同位素稀释-质谱法（HPLC-SID-MS）对α-syn蛋白的定量研究 | 第105-121页 |
| 4.1 简介 | 第105-106页 |
| 4.2 材料与方法 | 第106-110页 |
| 4.2.1 试剂 | 第106页 |
| 4.2.2 实验方法 | 第106-110页 |
| 4.3 结果 | 第110-118页 |
| 4.3.1 特异性肽段的筛选 | 第110-111页 |
| 4.3.2 碎裂电压和碰撞能量的优化 | 第111-113页 |
| 4.3.3 ~18O标记效率考察 | 第113-114页 |
| 4.3.4 方法学评价 | 第114-116页 |
| 4.3.5 帕金森病人血样中α-syn蛋白的定量 | 第116-118页 |
| 4.4 讨论 | 第118-121页 |
| 结论 | 第121-124页 |
| 参考文献 | 第124-140页 |
| 附录 | 第140-145页 |
| 攻读学位期间发表论文与研究成果清单 | 第145-146页 |
| 致谢 | 第146-147页 |
