| 摘要 | 第3-4页 |
| Abstract | 第4-5页 |
| 1 绪论 | 第8-17页 |
| 1.1 肿瘤细胞迁移 | 第8-10页 |
| 1.1.1 肿瘤细胞侵袭受流体剪切应力影响 | 第8-9页 |
| 1.1.2 细胞迁移的分子基础 | 第9-10页 |
| 1.2 RhoGDIα 与细胞迁移 | 第10-13页 |
| 1.2.1 细胞迁移过程中RhoGDIα 受非激酶调控 | 第11-12页 |
| 1.2.2 细胞迁移过程中磷酸化作用对RhoGDIα 的调控 | 第12-13页 |
| 1.2.3 细胞迁移过程中SUMO化对Rho GDIα 的影响 | 第13页 |
| 1.2.4 细胞迁移过程中胞外环境对RhoGDIα 的影响 | 第13页 |
| 1.3 荧光共振能量转移技术 | 第13-15页 |
| 1.4 本文的研究目的 | 第15-17页 |
| 2 基于FRET原理的sl- RhoGDIα 生物探针的设计与制备 | 第17-35页 |
| 2.1 FRET探针设计 | 第17-19页 |
| 2.1.1 原理 | 第17-18页 |
| 2.1.2 sl-RhoGDIα 探针与对照探针设计 | 第18-19页 |
| 2.2 材料 | 第19-24页 |
| 2.2.1 引物 | 第19-22页 |
| 2.2.2 试剂 | 第22页 |
| 2.2.3 仪器 | 第22页 |
| 2.2.4 溶液 | 第22-24页 |
| 2.3 方法 | 第24-31页 |
| 2.3.1 PCR扩增 | 第25-26页 |
| 2.3.2 胶回收纯化 | 第26-27页 |
| 2.3.3 限制性酶切 | 第27页 |
| 2.3.4 连接 | 第27-28页 |
| 2.3.5 转化 | 第28页 |
| 2.3.6 质粒小抽 | 第28页 |
| 2.3.7 定点突变 | 第28-30页 |
| 2.3.8 细胞培养与转染 | 第30页 |
| 2.3.9 蛋白纯化 | 第30-31页 |
| 2.3.10 FRET显微拍照与图像分析 | 第31页 |
| 2.4 结果 | 第31-33页 |
| 2.4.1 测序结果 | 第31页 |
| 2.4.2 探针蛋白验证 | 第31-32页 |
| 2.4.3 细胞转染荧光验证 | 第32页 |
| 2.4.4 质粒功能验证 | 第32-33页 |
| 2.5 讨论 | 第33-35页 |
| 3 剪切应力作用下RhoGDIα 与Rho家族蛋白亲和力的改变 | 第35-54页 |
| 3.1 材料和方法 | 第35-41页 |
| 3.1.1 试剂 | 第35页 |
| 3.1.2 仪器 | 第35-36页 |
| 3.1.3 细胞力学加载系统 | 第36-37页 |
| 3.1.4 实验设计 | 第37-39页 |
| 3.1.5 图像分析与处理 | 第39-40页 |
| 3.1.6 数据分析与处理 | 第40-41页 |
| 3.2 实验结果 | 第41-50页 |
| 3.2.1 不同大小剪切应力下RhoGDIα 与Rho家族蛋白间结合与细胞内定位有关 | 第41-45页 |
| 3.2.2 细胞膜流动性影响剪切应力作用下RhoGDIα 的活性 | 第45页 |
| 3.2.3 细胞骨架参与调解剪切应力引起的RhoGDIα 活性改变过程 | 第45-46页 |
| 3.2.4 剪切应力诱导RhoGDIα-Rho GTPases复合体解离与Src相关 | 第46-50页 |
| 3.3 讨论 | 第50-54页 |
| 3.3.1 层流剪切应力激活RhoGDIα 的机理 | 第50-52页 |
| 3.3.2 剪切应力作用下RhoGDIα 激活与Rho家族蛋白无关 | 第52-54页 |
| 结论 | 第54-55页 |
| 参考文献 | 第55-62页 |
| 附录A 处理荧光图片的Matlab程序 | 第62-69页 |
| 攻读硕士学位期间发表学术论文情况 | 第69-70页 |
| 致谢 | 第70-71页 |
