| 摘要 | 第8-9页 |
| Abstract | 第9-10页 |
| 缩略语表Table of Abbreviation | 第12页 |
| 第一章 文献综述 | 第12-24页 |
| 1.1 研究背景 | 第12-14页 |
| 1.1.1 植物生物反应器概述 | 第12-13页 |
| 1.1.2 禽流感及禽流感病毒 | 第13页 |
| 1.1.3 禽流感疫苗的研究概况 | 第13-14页 |
| 1.2 转基因植物疫苗研究进展和策略 | 第14-16页 |
| 1.2.1 转基因疫苗的表达系统 | 第14-15页 |
| 1.2.1.1 瞬时表达系统 | 第14-15页 |
| 1.2.1.2 稳定表达系统 | 第15页 |
| 1.2.1.3 叶绿体表达系统 | 第15页 |
| 1.2.2 转基因植物疫苗的研究现状及应用 | 第15-16页 |
| 1.3 转基因疫苗面临的前景与挑战 | 第16-19页 |
| 1.3.1 转基因疫苗取得的阶段性成果 | 第16-17页 |
| 1.3.2 提高外源蛋白高效表达的策略 | 第17-19页 |
| 1.3.2.1 合适的启动子 | 第17-18页 |
| 1.3.2.2 目的基因及调控序列的优化 | 第18页 |
| 1.3.2.3 定向表达 | 第18-19页 |
| 1.3.2.4 选择适宜受体 | 第19页 |
| 1.4 小麦转基因研究现状 | 第19-21页 |
| 1.4.1 小麦转基因的发展历史 | 第19-20页 |
| 1.4.2 转bar基因小麦的研究 | 第20-21页 |
| 1.5 植物细胞培养表达外源蛋白 | 第21-23页 |
| 1.5.1 植物悬浮细胞体系简介 | 第21-22页 |
| 1.5.2 宿主的选择 | 第22-23页 |
| 1.6 本研究目的及意义 | 第23-24页 |
| 第二章 基因枪介导的的小麦幼胚转化 | 第24-45页 |
| 2.1 实验材料 | 第24-26页 |
| 2.1.1 菌株及质粒DNA | 第24页 |
| 2.1.2 转化材料 | 第24页 |
| 2.1.3 试剂 | 第24页 |
| 2.1.4 培养基及试剂配方 | 第24-26页 |
| 2.1.4.1 克隆所需培养基及相关试剂 | 第24-25页 |
| 2.1.4.2 小麦幼胚转化所需培养基 | 第25页 |
| 2.1.4.3 基因组DNA提取所需试剂 | 第25-26页 |
| 2.1.4.4 Southern杂交试剂 | 第26页 |
| 2.2 实验仪器 | 第26页 |
| 2.3 实验方法 | 第26-35页 |
| 2.3.1 质粒DNA提取 | 第26-27页 |
| 2.3.2 PCR扩增 | 第27页 |
| 2.3.3 DNA片段回收 | 第27页 |
| 2.3.4 感受态细胞制备及热激转化 | 第27-28页 |
| 2.3.5 转化质粒DNA的制备 | 第28页 |
| 2.3.6 基因枪介导的小麦幼胚转化 | 第28-29页 |
| 2.3.6.1 接种幼胚 | 第28页 |
| 2.3.6.2 愈伤的诱导及高渗处理 | 第28页 |
| 2.3.6.3 基因枪转化愈伤组织 | 第28-29页 |
| 2.3.6.4 愈伤的恢复培养 | 第29页 |
| 2.3.6.5 愈伤的分化筛选 | 第29页 |
| 2.3.6.6 幼苗的生根、壮苗、春化和移栽 | 第29页 |
| 2.3.7 基因组DNA提取 | 第29-30页 |
| 2.3.7.1 小麦基因组DNA的提取 | 第29-30页 |
| 2.3.7.2 DNA质量检测与估量 | 第30页 |
| 2.3.8 转基因植株的鉴定 | 第30-35页 |
| 2.3.8.1 PPT涂抹鉴定 | 第30页 |
| 2.3.8.2 PCR鉴定 | 第30-31页 |
| 2.3.8.3 Southern杂交检测 | 第31-34页 |
| 2.3.8.4 T_1代材料的种植及鉴定 | 第34-35页 |
| 2.4 实验结果 | 第35-42页 |
| 2.4.1 单子叶植物表达载体构建 | 第35-36页 |
| 2.4.2 转化质粒DNA的估量 | 第36页 |
| 2.4.3 基因枪转化小麦植株再生过程 | 第36-37页 |
| 2.4.4 小麦转化材料及结果 | 第37-38页 |
| 2.4.5 分化筛选培养基上愈伤的不同状态 | 第38页 |
| 2.4.6 低温处理对扬麦158愈伤分化率及转化阳性率的影响 | 第38-39页 |
| 2.4.7 转基因植株的PPT抗性及分子水平检测 | 第39-42页 |
| 2.4.7.1 T_0、T_1代转基因植株PPT抗性检测 | 第39-41页 |
| 2.4.7.2 PCR鉴定 | 第41-42页 |
| 2.4.7.3 Southern杂交检测 | 第42页 |
| 2.5 讨论 | 第42-45页 |
| 第三章 农杆菌介导的烟草BY-2悬浮细胞转化 | 第45-51页 |
| 3.1 实验材料 | 第45-46页 |
| 3.1.1 菌株及转化材料 | 第45页 |
| 3.1.2 主要试剂 | 第45页 |
| 3.1.3 培养基配方 | 第45-46页 |
| 3.1.4 基因组DNA提取所需试剂 | 第46页 |
| 3.2 实验仪器 | 第46页 |
| 3.3 实验方法 | 第46-47页 |
| 3.3.1 材料准备 | 第46页 |
| 3.3.2 农杆菌转化烟草悬浮细胞 | 第46-47页 |
| 3.3.3 烟草基因组DNA的提取 | 第47页 |
| 3.4 实验结果 | 第47-49页 |
| 3.4.1 抗生素筛选浓度确定 | 第47-48页 |
| 3.4.2 转化材料及结果 | 第48-49页 |
| 3.4.3 转基因烟草的PCR鉴定 | 第49页 |
| 3.5 讨论 | 第49-51页 |
| 参考文献 | 第51-59页 |
| 致谢 | 第59页 |
