| 摘要 | 第4-5页 |
| ABSTRACT | 第5-6页 |
| 第一章 绪论 | 第11-38页 |
| 1.1 蛋白质的分离纯化 | 第11-25页 |
| 1.1.1 蛋白质分离前的准备 | 第12-15页 |
| 1.1.1.1 缓冲液 | 第12页 |
| 1.1.1.2 盐、金属离子和螯合剂 | 第12-13页 |
| 1.1.1.3 还原剂和去垢剂 | 第13页 |
| 1.1.1.4 蛋白质的环境因素 | 第13-14页 |
| 1.1.1.5 蛋白酶抑制剂 | 第14-15页 |
| 1.1.2 蛋白质的提取和溶解以及浓度测定 | 第15-17页 |
| 1.1.3 离子交换层析 | 第17-20页 |
| 1.1.3.1 原理 | 第17页 |
| 1.1.3.2 载体(树脂)的选择 | 第17-20页 |
| 1.1.3.2.1 树脂的准备和层析柱的填装 | 第18页 |
| 1.1.3.2.2 样品的制备 | 第18-19页 |
| 1.1.3.2.3 缓冲液的选择 | 第19页 |
| 1.1.3.2.4 上样和洗脱 | 第19-20页 |
| 1.1.3.2.5 再生及保存 | 第20页 |
| 1.1.4 凝胶过滤层析(GF) | 第20-23页 |
| 1.1.4.1 原理 | 第21页 |
| 1.1.4.2 载体(树脂)的选择 | 第21-22页 |
| 1.1.4.3 凝胶层析的一般步骤 | 第22-23页 |
| 1.1.4.3.1 凝胶的准备和层析柱的填装 | 第22页 |
| 1.1.4.3.2 上样及洗脱 | 第22-23页 |
| 1.1.4.3.3 再生和保存 | 第23页 |
| 1.1.5 亲和层析 | 第23-24页 |
| 1.1.5.1 疏水层析 | 第23-24页 |
| 1.1.5.1.1 原理 | 第23-24页 |
| 1.1.5.1.2 疏水作用层析的一般步骤 | 第24页 |
| 1.1.5.1.2.1 层析柱子的处理和填装 | 第24页 |
| 1.1.5.1.2.2 上样及洗脱 | 第24页 |
| 1.1.5.1.2.3 再生及保存 | 第24页 |
| 1.1.6 SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳 | 第24-25页 |
| 1.2 C-N裂解酶(E.C.4.3) | 第25-32页 |
| 1.2.1 3-酮井冈羟胺 A C-N裂解酶的研究进展 | 第25-27页 |
| 1.2.2 异胡豆苷合酶 | 第27-30页 |
| 1.2.3 Deacetylisoipecoside合成酶和 Deacetylipecoside合成酶 | 第30-31页 |
| 1.2.4 酶活及产物检测方法 | 第31-32页 |
| 1.2.4.1 3-酮井冈羟胺 A C-N裂解酶的酶活测定方法 | 第31-32页 |
| 1.2.4.2 井冈霉烯胺、井冈霉胺的检测 | 第32页 |
| 1.3 本论文的选题意义及研究内容 | 第32-33页 |
| 1.3.1 本论文的选题意义 | 第32-33页 |
| 1.3.2 本论文的研究内容 | 第33页 |
| 参考文献 | 第33-38页 |
| 第二章 菌种鉴定 | 第38-48页 |
| 2.1 材料与方法 | 第38-42页 |
| 2.1.1 菌种 | 第38页 |
| 2.1.2 培养基 | 第38-39页 |
| 2.1.3 试剂与仪器 | 第39页 |
| 2.1.4 菌种鉴定 | 第39-42页 |
| 2.1.4.1 丝状真菌鉴定依据 | 第39-40页 |
| 2.1.4.2 青霉属鉴定依据 | 第40-41页 |
| 2.1.4.3 18SrNDA序列的测定 | 第41-42页 |
| 2.1.4.3.1 菌株基因组 DNA的提取 | 第41-42页 |
| 2.1.4.3.2 PCR反应体系和反应条件 | 第42页 |
| 2.2 结果与讨论 | 第42-46页 |
| 2.2.1 形态观察 | 第42-45页 |
| 2.2.2 18SrDNA分子鉴定 | 第45-46页 |
| 2.3 本章小结 | 第46-47页 |
| 参考文献 | 第47-48页 |
| 第三章 产酶培养条件的优化 | 第48-70页 |
| 3.1 材料与方法 | 第48-54页 |
| 3.1.1 菌种 | 第48页 |
| 3.1.2 培养基 | 第48-49页 |
| 3.1.3 试剂与材料 | 第49-52页 |
| 3.1.4 蛋白质含量的测定 | 第52-53页 |
| 3.1.5 粗酶液的提取 | 第53页 |
| 3.1.6 生物量的测定 | 第53页 |
| 3.1.7 碳源的选择和碳源浓度的影响 | 第53页 |
| 3.1.8 氮源的选择和氮源浓度的影响 | 第53-54页 |
| 3.1.9 初始pH对菌体生长和发酵产酶的影响 | 第54页 |
| 3.1.10 不同接种量的影响 | 第54页 |
| 3.1.11 摇床不同摇速的影响 | 第54页 |
| 3.1.12 溶氧的影响 | 第54页 |
| 3.1.13 发酵时间的影响 | 第54页 |
| 3.1.14 响应面法优化培养条件 | 第54页 |
| 3.2 结果与讨论 | 第54-68页 |
| 3.2.1 碳源的选择和碳源浓度的影响 | 第54-56页 |
| 3.2.2 氮源的选择和氮源浓度的影响 | 第56-57页 |
| 3.2.3 初始pH对菌体生长和发酵产酶的影响 | 第57-58页 |
| 3.2.4 不同接种量的影响 | 第58-59页 |
| 3.2.5 摇床不同摇速的影响 | 第59-60页 |
| 3.2.6 溶氧的影响 | 第60-61页 |
| 3.2.7 发酵时间的影响 | 第61-62页 |
| 3.2.8 响应面法优化培养条件 | 第62-68页 |
| 3.3 本章小结 | 第68页 |
| 参考文献 | 第68-70页 |
| 第四章 3-酮井冈羟胺 A C-N裂解酶的分离纯化及其酶学特性的研究 | 第70-87页 |
| 4.1 材料与方法 | 第71-76页 |
| 4.1.1 主要实验仪器 | 第71页 |
| 4.1.2 主要实验试剂 | 第71-72页 |
| 4.1.3 菌种及培养方法 | 第72页 |
| 4.1.4 3-酮井冈羟胺 A C-N裂解酶酶活的测定 | 第72-73页 |
| 4.1.5 蛋白质含量测定 | 第73页 |
| 4.1.6 3-酮井冈羟胺 A C-N裂解酶粗酶液的提取 | 第73页 |
| 4.1.7 硫酸铵分级盐析 | 第73页 |
| 4.1.8 强碱性离子交换层析 | 第73-74页 |
| 4.1.9 疏水相互作用层析 | 第74-75页 |
| 4.1.10 电泳 | 第75页 |
| 4.1.11 酶蛋白分子量的确定 | 第75-76页 |
| 4.2 结果与讨论 | 第76-85页 |
| 4.2.1 3-酮井冈羟胺 A C-N裂解酶的分离纯化 | 第76-80页 |
| 4.2.1.1 硫酸铵分级盐析 | 第76页 |
| 4.2.1.2 强碱性离子交换层析 | 第76-77页 |
| 4.2.1.3 疏水相互作用层析 | 第77-79页 |
| 4.2.1.4 酶纯度的鉴定和分子量测定 | 第79页 |
| 4.2.1.5 纯化总表 | 第79-80页 |
| 4.2.2 3-酮井冈羟胺 A C-N裂解酶的酶学特性 | 第80-85页 |
| 4.2.2.1 pH对3-酮井冈羟胺 A C-N裂解酶酶活性的影响 | 第80-81页 |
| 4.2.2.2 温度对3-酮井冈羟胺 A C-N裂解酶的影响 | 第81-82页 |
| 4.2.2.3 金属离子对酶活性的影响 | 第82-83页 |
| 4.2.2.4 产物浓度对酶活的影响 | 第83-84页 |
| 4.2.2.5 底物浓度对酶活的影响 | 第84-85页 |
| 4.3 本章小结 | 第85页 |
| 参考文献 | 第85-87页 |
| 第五章 总结与展望 | 第87-89页 |
| 1 本论文的主要结论 | 第87页 |
| 2 本论文的展望 | 第87-89页 |
| 附录 | 第89-90页 |
| 致谢 | 第90-91页 |
| 攻读硕士期间发表的论文和专著 | 第91页 |
