缩略词表 | 第1-7页 |
摘要 | 第7-10页 |
ABSTRACT | 第10-12页 |
前言 | 第12-19页 |
1. 鼠疫菌的流行与概况 | 第12-13页 |
2. 鼠疫的致病机制 | 第13-15页 |
3. 宿主免疫 | 第15页 |
4. 鼠疫疫苗的研究 | 第15-16页 |
5. 本实验的目的和意义 | 第16-18页 |
6. 实验流程 | 第18-19页 |
1. 实验材料 | 第19页 |
·实验菌株及主要材料 | 第19页 |
·实验所用主要试剂 | 第19页 |
2. 实验方法 | 第19-29页 |
·重组质粒的构建 | 第19-22页 |
·引物设计与扩增目的片段 | 第19-20页 |
·目的片段和质粒酶切 | 第20-21页 |
·载体与目的基因的连接 | 第21页 |
·连接体系转化感受态细胞 | 第21页 |
·阳性克隆的增菌与筛选鉴定 | 第21-22页 |
·细胞复苏 | 第22-23页 |
·HEK293 细胞复苏 | 第22页 |
·HEK293 传代 | 第22页 |
·细胞铺板前计数 | 第22页 |
·转染HEK293 细胞 | 第22-23页 |
·融合蛋白免疫原性测定 | 第23-24页 |
·细胞裂解 | 第23页 |
·SDS-PAGE 蛋白电泳 | 第23页 |
·Western blot | 第23-24页 |
·共聚焦检测巨噬细胞RAW 吞噬 | 第24-25页 |
·增菌 | 第24页 |
·巨噬细胞RAW 铺板 | 第24页 |
·细胞吞噬实验 | 第24-25页 |
·双质粒电转化进入EV76 和201P- | 第25-26页 |
·真核质粒pIRE52 DsRed-Expre552 转入EV76 | 第25页 |
·重组真核质粒转入201P- | 第25页 |
·再次电转表达绿色荧光蛋白的原核质粒PBC-GFP | 第25-26页 |
·动物实验 | 第26-29页 |
·准备工作 | 第26页 |
·菌落计数 | 第26页 |
·免疫小鼠 | 第26页 |
·提取脾脏和腹腔巨噬细胞 | 第26-29页 |
·提取腹腔内的巨噬细胞 | 第27页 |
·脾脏处理 | 第27-28页 |
·分离中性粒细胞 | 第27页 |
·分离巨噬细胞 | 第27-28页 |
·分离树突细胞 | 第28页 |
·酶联免疫法检测小鼠体内抗体 | 第28-29页 |
3. 结果与讨论 | 第29-48页 |
·重组质粒转染293 细胞 | 第29-30页 |
·WESTERN BLOT 鉴定目的蛋白 | 第30-31页 |
·细胞吞噬实验 | 第31-32页 |
·原核质粒表达 | 第32-33页 |
·流式细胞仪检测结果 | 第33-46页 |
·酶联免疫法检测免疫小鼠抗体的结果 | 第46-48页 |
综述 | 第48-54页 |
参考文献 | 第54-57页 |
附录 | 第57-73页 |
实验所用主要仪器 | 第57-58页 |
实验所用试剂配制方法 | 第58-71页 |
硕士期间完成的其他工作 | 第71-72页 |
硕士期间发表的论文 | 第72-73页 |
个人简历 | 第73-74页 |
致谢 | 第74-75页 |