| Acknowledgement | 第1-6页 |
| 致谢 | 第6-7页 |
| Abstract | 第7-10页 |
| 中文摘要 | 第10-28页 |
| Introduction | 第28-33页 |
| Part Ⅰ:chpK/chpI toxin-antitoxin system | 第33-109页 |
| Chapter 1 #6Construction of pathogenic Leptospira interrogans strain Lai,chpK；chpI and chpIK genes prokaryotic expression systems andrChpK/rChpI rabbit anti-serum preparation # | 第33-67页 |
| ·) Materials | 第33-37页 |
| ·) Bacterials cells line used | 第33页 |
| ·) Plasmid vector used in this work | 第33页 |
| ·) Kits,solutions and others | 第33-36页 |
| ·) Instruments | 第36-37页 |
| ·) Methods | 第37-60页 |
| ·) Culture medium preparation | 第37-39页 |
| ·) Pathogenic Leptospira interrogans strain Lai culturing | 第39页 |
| ·) Pathogenic Leptospira interrogans strain Lai,genomic DNA extraction | 第39-40页 |
| ·) E.coli DH5a and E.coli BL21(DE3)Competent cells preparation | 第40-41页 |
| ·) chpI;chpK and chpIK genes amplification by using standard | 第41页 |
| ·) Signal peptide prediction | 第41页 |
| ·) PCR Primers designing | 第41-42页 |
| ·) PCR amplication of the chpI;chpK and chpIK genes | 第42-43页 |
| ·) PCR cycling conditions | 第43页 |
| ·) Agarose gel Electropheresis of the pcr product | 第43-44页 |
| ·) PCR products gel extraction and purification | 第44页 |
| ·) Ligation of the purified PCR product to the pMD 18-T plasmid vector(T-Acloning) | 第44-45页 |
| ·) Transformation of the ligation product in to the E.coli DH5a competent cellsand plating | 第45-46页 |
| ·) pMD18-T-chpI;pMD18-T-chpK and pMD18-T-chpIK plasmid extraction | 第46-47页 |
| ·) Double enzyme digestion of the pMD18-T-chpI;pMD18-T-chpK andpMD18-T-chpIK plasmids | 第47-48页 |
| ·) Sequencing of the recombinant plasmid transformed into the E.coli DH5a | 第48-49页 |
| ·) Construction of chpI;chpK and chpIK genes prokaryotic expression system | 第49页 |
| ·) pMD18-T-chpI;pMD18-T-chpK;pMD18-T-chpIK and pET42a Plasmids DNAextraction | 第49-50页 |
| ·) Double enzyme digestion of the pMD18-T-chpI;pMD18-T-chpK,pMD18-T-chpIK recombinant Plasmids DNA and the pET-42a plasmid vector | 第50-51页 |
| ·) pMD18-T-chpI;pMD18-T-chpK;pMD18-T-chpIK and pET42a Plasmids DNApurification | 第51页 |
| ·) Ligation of the chpI;chpK and chpIK genes to the pET42a plasmid vector | 第51页 |
| ·) Transformation of the ligation product into the E.coli BL21(DE3)competentcells:sub-cloning | 第51-53页 |
| ·) pET42a-chpI;pET42a-chpK and pET42a-chpIK recombinant plasmid DNAextraction | 第53页 |
| ·) Double enzyme digestion of the recombinant plasmid DNA | 第53页 |
| ·) Sequencing of the recombinant DNA | 第53页 |
| ·) Recombinant proteins rChpK and rChpI extraction and purification | 第53页 |
| ·) Protein expression | 第53-54页 |
| ·) SDS PAGE gel preparation | 第54-57页 |
| ·) Protein extraction | 第57-58页 |
| ·) Protein purification | 第58-59页 |
| ·) Rabbit anti-serum preparation | 第59-60页 |
| ·) Results and Discussion | 第60-65页 |
| ·) Results | 第60-64页 |
| ·) Discussion | 第64-65页 |
| ·) Conclusion | 第65页 |
| References | 第65-67页 |
| Chapter 2 #40Study of the chpK/chpI genes expression level after infection of the THP-1cells by the pathogenic Leptospira interrogans strain Lai | 第67-77页 |
| ·) Materials | 第67-68页 |
| ·) Bacterial and cell line used in this work | 第67页 |
| ·) Reagents and kits used in this work | 第67-68页 |
| ·) Experimental Instruments | 第68页 |
| ·) Methods | 第68-73页 |
| ·) Pathogenic Leptospira interrogans strain Lai culturing | 第68页 |
| ·) THP-1 cell culturing | 第68页 |
| ·) Real-Time-PCR Primers designing | 第68-69页 |
| ·) Infection of Human THP-1 cells by the pathogenic Leptospira interrogans trainLai | 第69-70页 |
| ·) Total RNA extraction of pathogenic Leptospira interrogans strain Lai | 第70-71页 |
| ·) Total RNA quantification | 第71页 |
| ·) Reverse-transcription PCR | 第71页 |
| ·) Reverse Transcription-PCR-condition | 第71-72页 |
| ·) Real-Time PCR Reaction | 第72-73页 |
| ·) Results and Discussion | 第73-75页 |
| ·) Results | 第73-74页 |
| ·) Discussion | 第74-75页 |
| ·) Conclusion | 第75页 |
| References | 第75-77页 |
| Chapter 3 #50Study of pathogenic Leptospira interrogans strain Lai toxic protein rChpKexternal secretion during host cell infection | 第77-82页 |
| ·) Materials | 第77页 |
| ·) Bacterial and cell line used in this work | 第77页 |
| ·) Buffers and solutions | 第77页 |
| ·) Methods | 第77-78页 |
| ·) Sample preparation | 第77-78页 |
| ·) SDS-PAGE electrophoresis gel running | 第78页 |
| ·) Western Bolt | 第78页 |
| ·) Results and Discussion | 第78-81页 |
| ·) Results | 第78-79页 |
| ·) Discussion | 第79-81页 |
| ·) Conclusion | 第81页 |
| References | 第81-82页 |
| Chapter 4 #55Study of the chpK gene expression into the eukaryotic cell system | 第82-95页 |
| ·) Materials | 第82-83页 |
| ·) Bacterial and Cells line used in this work | 第82页 |
| ·) Plasmid vector used in this work | 第82页 |
| ·) Kits and Others | 第82-83页 |
| ·) Experimental Instruments | 第83页 |
| ·) Methods | 第83-92页 |
| ·) Cell culturing | 第83页 |
| ·) Pathogenic Leptospira interrogans strain Lai,genomic DNA extraction | 第83-84页 |
| ·) PCR amplification of the target gene | 第84-88页 |
| ·) Primers design | 第84-85页 |
| ·) PCR conditions | 第85页 |
| ·) PCR cycling conditions | 第85-86页 |
| ·) A garose gel electrophoresis of the pcr product | 第86页 |
| ·) Agarose gel extraction and purification | 第86-87页 |
| ·) pCMV-Tag2C plasmid extraction | 第87-88页 |
| ·) Double enzyme digestion of the pCMV-Tag2C plasmid | 第88页 |
| ·) Agarose gel extraction and purification #61Refer to 2.2.5 | 第88页 |
| ·) Liagation of the amplified target gene to the pCMV-Tag2C plasmid | 第88-89页 |
| ·) Transformation of the pCMV-Tag2CchpK and pCMV-Tag2CchpI recombinantplasmids into the E.Coli DH5a competent cells and plating | 第89-90页 |
| ·) Sequencing of the pCMV-Tag2CchpK and pCMV-Tag2CchpI recombinantplasmids | 第90-91页 |
| ·) Recombinant plasmid pCMV-Tag2CchpK and pCMV-Tag2CchpI extraction | 第91页 |
| ·) HEK 293 cell line transfection | 第91-92页 |
| ·) Results and Discussion | 第92-93页 |
| ·) Results | 第92-93页 |
| ·) Discussion | 第93页 |
| ·) Conclusion | 第93-94页 |
| References | 第94-95页 |
| Chapter 5 Nuclease activity study of recombinant proteins rChpK and rChpI ofpathogenic Leptospira interrogans strain Lai | 第95-103页 |
| ·) Materials | 第95页 |
| ·) Cells line used in this work | 第95页 |
| ·Kits and others | 第95页 |
| ·) Instruments | 第95页 |
| ·) Method | 第95-98页 |
| ·) Pathogenic Leptospira interrogans strain genomic DNA extraction | 第95-97页 |
| ·) THP-1 cell genomic DNA extraction | 第97页 |
| ·) DNA quantification | 第97页 |
| ·) Enzymatic assay | 第97-98页 |
| ·) Results and Discussion | 第98-101页 |
| ·) Results | 第98-100页 |
| ·) Discussion | 第100-101页 |
| ·) Conclusion | 第101页 |
| References | 第101-103页 |
| Chapter 6 Study of rChpK toxin of pathogenic Leptospira interrogans strain Laiability to internalize the host Cell | 第103-109页 |
| ·) Materials | 第103-104页 |
| ·) Bacterial and Cell line used in this work | 第103页 |
| ·) Kits and others | 第103页 |
| ·) Experimental Instruments | 第103-104页 |
| ·) Methods | 第104-105页 |
| ·) THP-1 preparation | 第104页 |
| ·) Infection of the THP-1 cell | 第104页 |
| ·) Laser confocal Microspcope analysis | 第104-105页 |
| ·) Results and Discussion | 第105-107页 |
| ·) Results | 第105-106页 |
| ·) Discussion | 第106-107页 |
| ·) Conclusion | 第107页 |
| References | 第107-109页 |
| Part Ⅱ:mazF/mazE toxin-antitoxin system | 第109-181页 |
| Chapter 7 #82Construction of pathogenic Leptospira interrogans strain Lai,mazF；mazEand mazEF genes prokaryotic expression systems and rChpK/rChpI rabbitanti-serum preparation | 第109-136页 |
| ·) Materials | 第109-113页 |
| ·) Bacterials cells line used | 第109页 |
| ·) Plasmid vector used in this work | 第109页 |
| ·) Kits,solutions and others | 第109-112页 |
| ·) Instruments | 第112-113页 |
| ·) Methods | 第113-132页 |
| ·) Culture medium | 第113-115页 |
| ·) Pathogenic Leptospira interrogans strain Lai culturing | 第115-116页 |
| ·) Pathogenic Leptospira interrogans strain Lai, genomic DNA extraction | 第116-117页 |
| ·) E.Coli DH5a and E.Coli BL2 (DE3) Competent cells preparation | 第117页 |
| ·) mazF/mazE genes amplification by using standard PCR protocol | 第117-120页 |
| ·) Signal peptide prediction | 第117-118页 |
| ·) PCR Primers designing | 第118页 |
| ·) PCR amplication of the mazF/mazEgenes | 第118-119页 |
| ·) PCR cycling conditions | 第119页 |
| ·) Agarose gel Electropheresis of the pcr product | 第119-120页 |
| ·) Pcr product gel extraction and purification | 第120页 |
| ·) Ligation of the purified PCR product to the PMD18-T plasmid vector (T-Acloning) | 第120-127页 |
| ·) Transformation of the ligation product in to the E. coli DH5a competent cellsand plating | 第121-122页 |
| ·) PMD18-T-mazF; PMD18-T-mazE plasmids extraction | 第122-123页 |
| ·) Double enzyme digestion of the PMD18-T-mazF; PMD18-T-mazE plasmid | 第123-124页 |
| ·) Sequencing of the recombinant plasmid transform into the E. coli DH5a | 第124页 |
| ·) mazF/mazE genes prokaryotic expression system construction | 第124页 |
| ·) PMD18-T-mazF; PMD18-T-mazE and pET42a Plasmid DNA extraction | 第124-125页 |
| ·) Double enzyme digestion of the PMD18-T-mazE;PMD18-T-mazFrecombinant Plasmid DNA and the pET-42a plasmid vector | 第125-126页 |
| ·) PMD18-T-mazE；PMD18-T-mazF and pET42a Plasmid DNA extraction andpurification | 第126-127页 |
| ·) Ligation of the mazF and mazE gene to the pET42a plasmid vector:sub-cloning | 第127页 |
| ·) Transformation of the ligation product into the E.coli BL21(DE3)competentcells:sub-cloning | 第127页 |
| ·) pET42a-mazF and pET42a-mazE recombinant plasmid DNA extraction | 第127页 |
| ·) Double enzyme digestion of the recombinant plasmid DNA | 第127-128页 |
| ·) Sequencing of the recombinant DNA | 第128页 |
| ·) Recombinant proteins rMazF and rMazE expression and purification | 第128页 |
| ·) Protein expression | 第128-129页 |
| ·) SDS-PAGE gel preparation | 第129页 |
| ·) Protein extraction | 第129-130页 |
| ·) Protein purification | 第130-131页 |
| ·) rMazF/rMazE toxin-antitoxin rabbit anti-serum preparation | 第131-132页 |
| ·) Results and Discussion | 第132-134页 |
| ·) Results | 第132-134页 |
| ·) Discussion | 第134页 |
| ·) Conclusion | 第134页 |
| References | 第134-136页 |
| CHAPTER 8 Study of the mazF/mazE genes expression level after infection ofthe THP-1 cells by the pathogenic Leptospira interrogans strainLai | 第136-146页 |
| ·) Materials | 第136-137页 |
| ·) Bacterial and cell line used in this work | 第136页 |
| ·) Reagents and kits used in this work | 第136页 |
| ·) Experimental Instruments | 第136-137页 |
| ·) Methods | 第137-142页 |
| ·) Pathogenic Leptospira interrogans strain Lai culturing | 第137页 |
| ·) THP-1 cell culturing | 第137页 |
| ·) Real-Time-PCR Primers designing | 第137-138页 |
| ·) Infection of THP-1 cells by the pathogenic Leptospira interrogans strain Lai | 第138-139页 |
| ·) Leptospires Total RNA extraction | 第139-140页 |
| ·) Total RNA quantification | 第140页 |
| ·) Reverse-transcription PCR | 第140页 |
| ·) Reverse Transcription-PCR-condition | 第140页 |
| ·) Real time PCR Reaction | 第140-142页 |
| ·) Results and Discussion | 第142-144页 |
| ·) Results | 第142-143页 |
| ·) Discussion | 第143-144页 |
| ·) Conclusion | 第144页 |
| References | 第144-146页 |
| Chapter 9 #119Study of pathogenic Leptospira interrogans strain Lai toxic protein rMazFexternal secretion during host cell infection | 第146-153页 |
| ·) Materials | 第146页 |
| ·) Bacterial and cell line used in this work | 第146页 |
| ·Buffers and solutions | 第146页 |
| ·) Methods | 第146-147页 |
| ·) Sample preparation | 第146-147页 |
| ·) SDS-PAGE electrophoresis gel running | 第147页 |
| ·) Western blot analysis | 第147页 |
| ·) Results and Discussion | 第147-150页 |
| ·) Results | 第147-148页 |
| ·) Discussion | 第148-150页 |
| ·) Conclusion | 第150页 |
| References | 第150-153页 |
| Chapter 10 #126Study of the mazF/mazE gene expression in the eukaryotic cells system | 第153-167页 |
| ·) Materials | 第153-154页 |
| ·) Bacterial and Cells line used in this work | 第153页 |
| ·) Plasmid vector used in this work | 第153页 |
| ·) Kits and Others | 第153-154页 |
| ·) Instruments | 第154页 |
| ·) Methods | 第154-163页 |
| ·) Cell culturing | 第154页 |
| ·) Pathogenic leptospira genomic DNA extraction | 第154-155页 |
| ·) PCR amplification of the target gene | 第155-163页 |
| ·) Primers design | 第155-156页 |
| ·) PCR condition | 第156页 |
| ·) PCR cycling conditions | 第156-157页 |
| ·) Agarose gel electrophoresis of the pcr product | 第157页 |
| ·) Agarose gel extraction and purification | 第157-158页 |
| ·) pCMV-Tag2C plasmid extraction | 第158-159页 |
| ·) Double enzyme digestion of the pCMV-Tag2C plasmid | 第159-160页 |
| ·) Agarose gel extraction and purification | 第160页 |
| ·) Liagation of the amplified target gene to the pCMV-Tag2C plasmid | 第160页 |
| ·) Transformation of the pCMV-Tag2C~(mazF) and pCMV-Tag2C~(mazE) recombinantplasmids in to the E.Coli DH5a competent cells and plating | 第160-162页 |
| ·) Sequencing of the the pCMV-Tag2C~(mazF) and pCMV-Tag2C~(mazE) recombinantplasmids | 第162页 |
| ·) Recombinant plasmid pCMV-Tag2C~(mazF) and pCMV-Tag2C~(mazE) extraction | 第162页 |
| ·) HEK 293 cell line transfection | 第162-163页 |
| ·) Results and Discussion | 第163-165页 |
| ·) Results | 第163-164页 |
| ·) Discussion | 第164-165页 |
| ·) Conclusion | 第165页 |
| References | 第165-167页 |
| Chapter11 #140Nuclease activity study of recombinant proteins rMazF and rMazE ofpathogenic Leptospira interrogans strain Lai | 第167-175页 |
| ·) Materials | 第167页 |
| ·) Bacterials and Cells line used in this work | 第167页 |
| ·) Kits and others | 第167页 |
| ·) Experimental Instruments | 第167页 |
| ·) Methods | 第167-170页 |
| ·) Pathogenic Leptospira interrogans strain,genomic DNA extraction | 第167-168页 |
| ·) THP-1 cell genomic DNA extraction | 第168-169页 |
| ·) DNA quantification | 第169页 |
| ·) Cleavage of Total RNA and genomic DNA by MazF | 第169-170页 |
| ·) Results and Discussion | 第170-173页 |
| ·) Results | 第170-172页 |
| ·) Discussion | 第172-173页 |
| ·) Conclusion | 第173页 |
| References | 第173-175页 |
| Chapter 12 Study of rMazF, toxin of pathogenic Leptospira interrogans strainLai, ability to internalize the host Cell | 第175-181页 |
| ·) Materials | 第175页 |
| ·) Bacterial and Cell line used in this work | 第175页 |
| ·) Kits and others | 第175页 |
| ·) Experimental Instruments | 第175页 |
| ·) Methods | 第175-177页 |
| ·) THP-1 preparation | 第175-176页 |
| ·) Pathogenic Leptospira interrogans strain Lai preparation | 第176页 |
| ·) Infection of the THP-1 cell | 第176页 |
| ·) Laser confocal Microspcope analysis | 第176-177页 |
| ·) Results and Discussions | 第177-178页 |
| ·) Results | 第177页 |
| ·) Discussion | 第177-178页 |
| ·) Conclusion | 第178-179页 |
| ·) General conclusion and perspectives | 第179-180页 |
| References | 第180-181页 |
| Glossary | 第181-182页 |
| 英文综述 | 第182-196页 |
| References | 第189-196页 |
