| 摘要 | 第8-10页 |
| Abstract | 第10-12页 |
| 缩略语表 | 第13-15页 |
| 1 文献综述 | 第15-36页 |
| 1.1 猪链球菌病概述 | 第15-19页 |
| 1.1.1 病原学 | 第15-16页 |
| 1.1.2 流行病学 | 第16-17页 |
| 1.1.3 临床症状 | 第17-18页 |
| 1.1.4 病理学 | 第18页 |
| 1.1.5 诊断和病原鉴定 | 第18-19页 |
| 1.1.6 治疗和防控 | 第19页 |
| 1.2 猪链球菌新型毒力（相关）因子 | 第19-28页 |
| 1.2.1 双组分调控系统 | 第19-21页 |
| 1.2.2 一般调节因子 | 第21-23页 |
| 1.2.3 酶类 | 第23-26页 |
| 1.2.4 其它毒力（相关）因子 | 第26-28页 |
| 1.3 SPX调节因子研究进展 | 第28-33页 |
| 1.3.1 枯草芽孢杆菌Spx调节因子 | 第29-30页 |
| 1.3.2 金黄色葡萄球菌和表皮葡萄球菌的Spx | 第30页 |
| 1.3.3 粪肠球菌Spx调节因子 | 第30-31页 |
| 1.3.4 链球菌种类的Spx调节因子 | 第31-32页 |
| 1.3.5 炭疽杆菌Spx调节因子 | 第32-33页 |
| 1.4 NADH氧化酶与病原菌的致病性 | 第33-35页 |
| 1.4.1 肺炎链球菌的NADH氧化酶 | 第33页 |
| 1.4.2 B群链球菌的NADH氧化酶 | 第33-34页 |
| 1.4.3 血链球菌的NADH氧化酶 | 第34页 |
| 1.4.4 肉牛传染性牛支原体的NADH氧化酶 | 第34-35页 |
| 1.5 研究内容 | 第35-36页 |
| 2 Spx调节因子调控猪链球菌2型的应激反应和致病性 | 第36-74页 |
| 2.1 前言 | 第36-38页 |
| 2.2 材料和方法 | 第38-53页 |
| 2.2.1 菌株、质粒和培养条件 | 第38-39页 |
| 2.2.2 主要试剂 | 第39-40页 |
| 2.2.3 培养基与抗生素的配制 | 第40页 |
| 2.2.4 主要缓冲液及其配制 | 第40-41页 |
| 2.2.5 引物 | 第41-42页 |
| 2.2.6 实验动物 | 第42-43页 |
| 2.2.7 自杀性重组质粒的构建 | 第43-46页 |
| 2.2.8 猪链球菌2型基因缺失突变株的构建 | 第46-47页 |
| 2.2.9 突变株和野生株的体外生长特性研究 | 第47页 |
| 2.2.10 透射电镜观察细菌形态 | 第47页 |
| 2.2.11 应激实验 | 第47-48页 |
| 2.2.12 小鼠感染实验 | 第48页 |
| 2.2.13 小鼠脑组织切片 | 第48页 |
| 2.2.14 竞争感染实验 | 第48-49页 |
| 2.2.15 感染小鼠血清中炎性因子的检测 | 第49-50页 |
| 2.2.16 全血杀菌实验 | 第50-51页 |
| 2.2.17 猪链球菌RNA的提取 | 第51页 |
| 2.2.18 基因表达谱芯片 | 第51-52页 |
| 2.2.19 荧光定量PCR | 第52-53页 |
| 2.2.20 统计分析 | 第53页 |
| 2.3 结果与分析 | 第53-69页 |
| 2.3.1 猪链球菌中Spx同源蛋白的鉴定 | 第53-55页 |
| 2.3.2 自杀性重组质粒的构建及鉴定 | 第55页 |
| 2.3.3 猪链球菌2型spxA1和spxA2基因缺失突变株的筛选与鉴定 | 第55-57页 |
| 2.3.4 突变株和野生株体外生长特性的比较 | 第57-58页 |
| 2.3.5 突变株和野生株的透射电镜观察 | 第58-59页 |
| 2.3.6 SpxA1和SpxA2调控猪链球菌2型的应激反应 | 第59-61页 |
| 2.3.7 SpxA1和SpxA2影响猪链球菌2型对小鼠的致病性 | 第61-64页 |
| 2.3.8 SpxA1和SpxA2影响猪链球菌2型诱导小鼠产生炎性因子的能力 | 第64-65页 |
| 2.3.9 缺失 spx 基因影响猪链球菌 2 型在猪全血中的存活 | 第65页 |
| 2.3.10 基因芯片结果表明Spx调节因子发挥全局性调控作用 | 第65-68页 |
| 2.3.11 一些氧化应激反应相关的基因受SpxA1或SpxA2调控 | 第68-69页 |
| 2.3.12 一些毒力相关因子在突变株中的表达发生变化 | 第69页 |
| 2.4 讨论 | 第69-72页 |
| 2.4.1 课题的选择 | 第69-70页 |
| 2.4.2 Spx调节因子与猪链球菌2型的应激反应 | 第70-71页 |
| 2.4.3 Spx调节因子与猪链球菌2型的致病性 | 第71-72页 |
| 2.4.4 Spx调节因子的全局性调控作用 | 第72页 |
| 2.5 小结 | 第72-74页 |
| 3 NADH氧化酶影响猪链球菌2型的氧化应激反应和毒力 | 第74-111页 |
| 3.1 前言 | 第74-75页 |
| 3.2 材料和方法 | 第75-89页 |
| 3.2.1 菌株、质粒及培养条件 | 第75-79页 |
| 3.2.2 主要试剂 | 第79页 |
| 3.2.3 培养基与抗生素的配制 | 第79-80页 |
| 3.2.4 主要缓冲液及其配制 | 第80-81页 |
| 3.2.5 引物 | 第81-83页 |
| 3.2.6 实验动物 | 第83页 |
| 3.2.7 自杀性重组质粒和猪链球菌2型基因缺失突变株的构建 | 第83页 |
| 3.2.8 C?nox互补菌株的构建 | 第83-84页 |
| 3.2.9 NADH氧化酶的定点突变 | 第84页 |
| 3.2.10 重组蛋白的表达和纯化 | 第84-85页 |
| 3.2.11 蛋白浓度的测定 | 第85页 |
| 3.2.12 NADH氧化酶酶活的测定 | 第85页 |
| 3.2.13 将突变体NADH氧化酶互补到?nox突变株 | 第85页 |
| 3.2.14 在?spxA1突变株中超表达NADH氧化酶和SOD | 第85-86页 |
| 3.2.15 猪链球菌RNA的提取 | 第86页 |
| 3.2.16 荧光定量PCR | 第86页 |
| 3.2.17 氧化应激实验 | 第86-87页 |
| 3.2.18 小鼠感染实验 | 第87-88页 |
| 3.2.19 炎性因子的测量 | 第88页 |
| 3.2.20 全血杀菌实验 | 第88页 |
| 3.2.21 仔猪感染实验 | 第88-89页 |
| 3.2.22 统计分析 | 第89页 |
| 3.3 结果与分析 | 第89-106页 |
| 3.3.1 猪链球菌2型 0350、nox、tpx和copA基因缺失突变株的构建 | 第89-91页 |
| 3.3.2 预实验检测四个基因在氧化应激反应和毒力方面的功能 | 第91-92页 |
| 3.3.3 C?nox互补菌株的鉴定 | 第92-93页 |
| 3.3.4 NADH氧化酶的生物信息学分析 | 第93-96页 |
| 3.3.5 突变株?nox抗氧化能力减弱 | 第96-97页 |
| 3.3.6 NADH氧化酶影响猪链球菌2型对小鼠的致病性 | 第97-99页 |
| 3.3.7 NADH氧化酶促进猪链球菌2型在小鼠全血中的存活 | 第99-100页 |
| 3.3.8 突变株?nox对仔猪的致病性减弱 | 第100-102页 |
| 3.3.9 NADH氧化酶的酶活在氧化应激反应中发挥着重要作用，在毒力方面发挥着相对次要的作用 | 第102-104页 |
| 3.3.10 超表达NADH氧化酶能提高?spxA1抗氧化应激能力和毒力，但超表达SOD不能 | 第104-106页 |
| 3.4 讨论 | 第106-110页 |
| 3.4.1 课题的来源 | 第106-107页 |
| 3.4.2 NADH氧化酶与猪链球菌2型的氧化应激反应 | 第107页 |
| 3.4.3 NADH氧化酶与猪链球菌2型的毒力 | 第107-108页 |
| 3.4.4 NADH氧化酶的酶活与猪链球菌2型的氧化应激反应和毒力 | 第108-109页 |
| 3.4.5 NADH氧化酶和SOD对SpxA1功能的影响 | 第109页 |
| 3.4.6 小鼠感染模型评估猪链球菌毒力存在的问题 | 第109-110页 |
| 3.5 小结 | 第110-111页 |
| 4 结论与展望 | 第111-112页 |
| 参考文献 | 第112-133页 |
| 附录 个人简历 | 第133-135页 |
| 致谢 | 第135-136页 |
