| 摘要 | 第8-12页 |
| ABSTRACT | 第12-17页 |
| 第一章 前言 | 第18-35页 |
| 1.1 持久性植物病毒经介体昆虫传播的机制 | 第18-22页 |
| 1.1.1 持久非增殖型病毒的虫传机制 | 第18-20页 |
| 1.1.2 持久增殖型病毒的虫传机制 | 第20-22页 |
| 1.2 病毒经介体昆虫的垂直传播 | 第22-28页 |
| 1.2.1 昆虫的生殖系统 | 第22-23页 |
| 1.2.2 病毒在昆虫中的垂直传播机制 | 第23-28页 |
| 1.3 硫酸乙酰肝素糖蛋白与病毒侵染的关系 | 第28-29页 |
| 1.4 水稻瘤矮病毒 | 第29-33页 |
| 1.4.1 水稻瘤矮病的病害特征、分布和发生规律 | 第29-31页 |
| 1.4.2 RGDV的寄主范围和传播介体 | 第31页 |
| 1.4.3 RGDV的基因组及蛋白功能研究 | 第31-32页 |
| 1.4.4 RGDV与介体电光叶蝉研究现状 | 第32-33页 |
| 1.5 本研究的目的和意义 | 第33-35页 |
| 第二章 RGDV突破介体电光叶蝉唾液腺释放屏障的机制 | 第35-59页 |
| 2.1 材料与试剂 | 第35-36页 |
| 2.1.1 水稻病毒毒源和昆虫 | 第35页 |
| 2.1.2 试剂与抗体 | 第35-36页 |
| 2.1.3 载体、菌株和细胞 | 第36页 |
| 2.2 实验方法 | 第36-46页 |
| 2.2.1 电光叶蝉饲毒 | 第36页 |
| 2.2.2 电镜观察RGDV在电光叶蝉唾液腺中的分布 | 第36-38页 |
| 2.2.3 提纯抗体IgG | 第38页 |
| 2.2.4 荧光抗体的制备 | 第38页 |
| 2.2.5 免疫荧光标记电光叶蝉唾液腺 | 第38-39页 |
| 2.2.6 Pns11在Sf9细胞中的表达 | 第39-41页 |
| 2.2.7 Pns11与电光叶蝉actin互作验证 | 第41-44页 |
| 2.2.8 通过RNA干扰抑制Pns11在电光叶蝉唾液腺中的表达 | 第44-45页 |
| 2.2.9 RT-qPCR检测 | 第45页 |
| 2.2.10 Western blot | 第45-46页 |
| 2.3 结果与分析 | 第46-56页 |
| 2.3.1 电光叶蝉唾液腺 | 第46-47页 |
| 2.3.2 RGDV在电光叶蝉唾液腺中的分布 | 第47页 |
| 2.3.3 Pns11在电光叶蝉中肠和唾液腺中形成不同的结构帮助病毒运动 | 第47-49页 |
| 2.3.4 Pns11形成纤维状结构帮助RGDV突破唾液腺释放屏障 | 第49-52页 |
| 2.3.5 Pns11在Sf9细胞中形成小管结构和纤维状结构 | 第52-53页 |
| 2.3.6 Pns11蛋白与电光叶蝉actin的互作 | 第53-54页 |
| 2.3.7 利用RNAi抑制Pns11纤维结构的形成阻碍RGDV在唾液腺中的释放和传播 | 第54-56页 |
| 2.4 讨论 | 第56-59页 |
| 第三章 RGDV引起的电光叶蝉唾液蛋白组分变化分析 | 第59-72页 |
| 3.1 供试昆虫及饲毒 | 第59页 |
| 3.2 实验方法 | 第59-61页 |
| 3.2.1 唾液蛋白的收集 | 第59-60页 |
| 3.2.2 收集唾液蛋白的浓缩 | 第60页 |
| 3.2.3 蛋白质定量 | 第60页 |
| 3.2.4 SDS-PAGE检测 | 第60页 |
| 3.2.5 Label-free测定 | 第60页 |
| 3.2.6 差异蛋白的富集分析 | 第60-61页 |
| 3.3 结果与分析 | 第61-70页 |
| 3.3.1 唾液蛋白浓度测定与SDS-PAGE分析 | 第61-62页 |
| 3.3.2 唾液蛋白的LC-MS/MS分析 | 第62页 |
| 3.3.3 唾液蛋白的鉴定以及注释 | 第62-63页 |
| 3.3.4 唾液蛋白的定量以及差异分析 | 第63-70页 |
| 3.4 讨论 | 第70-72页 |
| 第四章 RGDV在介体电光叶蝉中垂直传播的机制 | 第72-96页 |
| 4.1 材料与试剂 | 第72-73页 |
| 4.1.1 水稻病毒毒源和昆虫 | 第72页 |
| 4.1.2 试剂与抗体 | 第72页 |
| 4.1.3 载体和菌株 | 第72-73页 |
| 4.2 实验方法 | 第73-78页 |
| 4.2.1 交配垂直传毒实验 | 第73页 |
| 4.2.2 免疫荧光标记电光叶蝉雄性生殖系统和精子 | 第73-74页 |
| 4.2.3 雄虫传毒路径观察 | 第74页 |
| 4.2.4 交配水平传毒实验 | 第74-75页 |
| 4.2.5 电镜观察RGDV在电光叶蝉雄性生殖系统中的分布 | 第75页 |
| 4.2.6 RGDV的粗提纯 | 第75页 |
| 4.2.7 RGDV P2N、P8和Pns11蛋白的原核表达 | 第75-76页 |
| 4.2.8 病毒或蛋白与精子的体外孵育实验 | 第76页 |
| 4.2.9 抗体阻断实验 | 第76-77页 |
| 4.2.10 精子受体HSPG的获得与分析 | 第77页 |
| 4.2.11 验证P8与电光叶蝉HSPG的互作 | 第77-78页 |
| 4.2.12 HSPG荧光标记和体外结合功能验证 | 第78页 |
| 4.3 结果与分析 | 第78-93页 |
| 4.3.1 雄虫在RGDV的垂直传播中处于主导地位 | 第78-79页 |
| 4.3.2 RGDV在电光叶蝉雄性生殖系统中的分布 | 第79-81页 |
| 4.3.3 电光叶蝉的精子可以携带病毒 | 第81-82页 |
| 4.3.4 雄虫交配传毒路径 | 第82-84页 |
| 4.3.5 RGDV在虫体间的水平传播 | 第84页 |
| 4.3.6 体外孵育体系的建立 | 第84-85页 |
| 4.3.7 RGDV P8介导病毒与精子特异性结合 | 第85-90页 |
| 4.3.8 HSPG序列的获得与分析 | 第90页 |
| 4.3.9 RGDV P8与电光叶蝉HSPG互作 | 第90-91页 |
| 4.3.10 HSPG在精子上的分布与功能验证 | 第91-93页 |
| 4.4 讨论 | 第93-96页 |
| 第五章 精子介导RGDV垂直传播对病害发生流行的影响 | 第96-105页 |
| 5.1 材料与试剂 | 第96页 |
| 5.1.1 水稻、病毒和昆虫 | 第96页 |
| 5.1.2 无毒电光叶蝉种群及高带毒电光叶蝉种群的建立 | 第96页 |
| 5.2 实验方法 | 第96-98页 |
| 5.2.1 RGDV对不同交配组产卵孵化率和形态的影响 | 第96-97页 |
| 5.2.2 RGDV对电光叶蝉雄虫和雌虫寿命的影响 | 第97页 |
| 5.2.3 RGDV对电光叶蝉雄虫交配能力的影响 | 第97页 |
| 5.2.4 RGDV在次要介体黑尾叶蝉中的垂直传播交配实验 | 第97页 |
| 5.2.5 田间病害及叶蝉带毒率调查 | 第97-98页 |
| 5.2.6 数据分析 | 第98页 |
| 5.3 结果与分析 | 第98-103页 |
| 5.3.1 RGDV对电光叶蝉雄虫寿命的影响较小 | 第98-99页 |
| 5.3.2 RGDV对电光叶蝉雄虫交配能力没有明显的影响 | 第99页 |
| 5.3.3 RGDV经雄虫垂直传播对后代卵的影响较小 | 第99-101页 |
| 5.3.4 越冬期田间电光叶蝉带毒率调查 | 第101-103页 |
| 5.4 讨论 | 第103-105页 |
| 全文总结与展望 | 第105-107页 |
| 参考文献 | 第107-123页 |
| 附录 | 第123-127页 |
| 攻读学位期间的学术论文与研究成果 | 第127-128页 |
| 致谢 | 第128页 |
