| 摘要 | 第4-5页 |
| Abstract | 第5-6页 |
| 引言 | 第9-10页 |
| 1 文献综述 | 第10-17页 |
| 1.1 生物靶标蛋白 | 第10页 |
| 1.2 多聚半乳糖醛酸与多聚半乳糖醛酸酶 | 第10-13页 |
| 1.2.1 多聚半乳糖醛酸 | 第10-11页 |
| 1.2.2 多聚半乳糖醛酸酶 | 第11-13页 |
| 1.3 天冬氨酸氨基转移酶 | 第13-15页 |
| 1.3.1 氨基转移酶 | 第13-14页 |
| 1.3.2 天冬氨酸氨基转移酶 | 第14-15页 |
| 1.4 选题依据和研究内容 | 第15-17页 |
| 1.4.1 选题依据 | 第15-16页 |
| 1.4.2 研究内容 | 第16-17页 |
| 2 绿盲蝽多聚半乳糖醛酸酶基因的克隆、表达及生物信息学分析 | 第17-36页 |
| 2.1 引言 | 第17页 |
| 2.2 实验材料及方法 | 第17-27页 |
| 2.2.1 实验材料 | 第17-18页 |
| 2.2.2 绿盲蝽的total RNA提取 | 第18页 |
| 2.2.3 多聚半乳糖醛酸酶基因cDNA核心片段的克隆与序列分析 | 第18-19页 |
| 2.2.4 5'RACE | 第19-21页 |
| 2.2.5 3'RACE | 第21-22页 |
| 2.2.6 获得多聚半乳糖醛酸酶基因的碱基序列及其全序列分析 | 第22页 |
| 2.2.7 多聚半乳糖醛酸酶的理化性质、二级和三级结构的分析 | 第22-23页 |
| 2.2.8 表达载体pPIC9-PG的构建 | 第23-26页 |
| 2.2.9 绿盲蝽多聚半乳糖醛酸酶在毕赤酵母中的诱导表达 | 第26页 |
| 2.2.10 绿盲蝽多聚半乳糖醛酸酶的活性分析 | 第26-27页 |
| 2.3 结果与分析 | 第27-34页 |
| 2.3.1 绿盲蝽多聚半乳糖醛酸酶的基因克隆结果及序列分析 | 第27-29页 |
| 2.3.2 多聚半乳糖醛酸酶的二级结构 | 第29-30页 |
| 2.3.3 多聚半乳糖醛酸酶的三级结构 | 第30-31页 |
| 2.3.4 表达载体pPIC9-PG的构建 | 第31-33页 |
| 2.3.5 阳性转化子的获得 | 第33页 |
| 2.3.6 绿盲蝽多聚半乳糖醛酸酶在毕赤酵母中的表达 | 第33-34页 |
| 2.4 小结 | 第34-36页 |
| 3 天冬氨酸氨基转移酶的重组制备与抑制机理分析 | 第36-47页 |
| 3.1 引言 | 第36-37页 |
| 3.2 实验材料及方法 | 第37-41页 |
| 3.2.1 实验材料 | 第37页 |
| 3.2.2 表达载体转化大肠杆菌BL21(DE3) | 第37-38页 |
| 3.2.3 重组转化子的菌体PCR检测 | 第38-39页 |
| 3.2.4 重组蛋白表达条件的优化 | 第39页 |
| 3.2.5 天冬氨酸氨基转移酶在大肠杆菌中的诱导表达 | 第39页 |
| 3.2.6 天冬氨酸氨基转移酶的分离纯化 | 第39-40页 |
| 3.2.7 天冬氨酸氨基转移酶的性质表征 | 第40页 |
| 3.2.8 天冬氨酸氨基转移酶的抑制剂筛选 | 第40页 |
| 3.2.9 天冬氨酸氨基转移酶与氨基氧乙酸的分子对接 | 第40-41页 |
| 3.3 结果与分析 | 第41-46页 |
| 3.3.1 阳性转化子的筛选 | 第41页 |
| 3.3.2 天冬氨酸氨基转移酶的分离纯化 | 第41-43页 |
| 3.3.3 重组天冬氨酸氨基转移酶的性质表征 | 第43页 |
| 3.3.4 天冬氨酸氨基转移酶的抑制剂筛选 | 第43-44页 |
| 3.3.5 候选抑制剂抑制效果的评价 | 第44-45页 |
| 3.3.6 天冬氨酸氨基转移酶与氨基氧乙酸(AOA)的分子对接 | 第45-46页 |
| 3.4 小结 | 第46-47页 |
| 结论 | 第47-48页 |
| 参考文献 | 第48-52页 |
| 附录 常用仪器一览表 | 第52-53页 |
| 攻读硕士学位期间发表学术论文情况 | 第53-54页 |
| 致谢 | 第54-55页 |
