| 致谢 | 第6-7页 |
| 摘要 | 第7-9页 |
| Abstract | 第9-10页 |
| 目次 | 第11-15页 |
| 第一章 前言 | 第15-25页 |
| 1.1 几丁质与壳聚糖 | 第15-16页 |
| 1.2 几丁质代谢途径 | 第16-19页 |
| 1.2.1 几丁质合成酶 | 第18-19页 |
| 1.2.2 几丁质降解酶系 | 第19页 |
| 1.3 昆虫几丁质降解酶系基因研究进展 | 第19-23页 |
| 1.3.1 昆虫几丁质酶基因研究进展 | 第19-21页 |
| 1.3.2 昆虫β-N-乙酰已糖胺酶基因研究进展 | 第21-22页 |
| 1.3.3 昆虫几丁质脱乙酰酶基因研究进展 | 第22-23页 |
| 1.4 褐飞虱概况 | 第23-24页 |
| 1.5 本研究的目的意义 | 第24-25页 |
| 第二章 常用仪器、试剂与方法 | 第25-29页 |
| 2.1 常用仪器及主要试剂 | 第25页 |
| 2.1.1 常用仪器 | 第25页 |
| 2.1.2 主要试剂 | 第25页 |
| 2.2 常规实验方法 | 第25-28页 |
| 2.2.1 CaCl_2法制备TG1感受态细胞 | 第25-26页 |
| 2.2.2 载体pMD-19T的连接 | 第26页 |
| 2.2.3 热击转化 | 第26-27页 |
| 2.2.4 质粒DNA提取 | 第27页 |
| 2.2.5 酶切反应 | 第27页 |
| 2.2.6 琼脂糖凝胶回收纯化 | 第27-28页 |
| 2.3 常规试剂配制 | 第28-29页 |
| 2.3.1 LB培养基 | 第28页 |
| 2.3.2 琼脂糖凝胶电泳 | 第28页 |
| 2.3.3 磷酸缓冲液(1×PBS)配制 | 第28页 |
| 2.3.4 抗生素的配制 | 第28-29页 |
| 第三章 褐飞虱几丁质酶的基因分析及生物学功能 | 第29-57页 |
| 引言 | 第29-30页 |
| 3.1 实验材料 | 第30-31页 |
| 3.1.1 昆虫饲养 | 第30页 |
| 3.1.2 材料与试剂 | 第30-31页 |
| 3.2 实验方法 | 第31-36页 |
| 3.2.1 褐飞虱基因组及转录组搜索及序列分析 | 第31-32页 |
| 3.2.2 总RNA提取与cDNA第一链合成 | 第32页 |
| 3.2.3 实时荧光定量PCR检测 | 第32-34页 |
| 3.2.4 原位杂交(In Situ Hybridazation,ISH)定位NlCht4基因 | 第34-35页 |
| 3.2.5 双链RNA(dsRNA)合成及RNA干扰 | 第35页 |
| 3.2.6 透射电子显微镜(Transmission Electron Microscope,TEM)检测组织内部干扰效果 | 第35-36页 |
| 3.3 结果与分析 | 第36-55页 |
| 3.3.1 褐飞虱几丁质酶基因的确定与分类 | 第36-41页 |
| 3.3.2 褐飞虱几丁质酶基因的基因结构分析 | 第41页 |
| 3.3.3 褐飞虱几丁质酶的结构域分析 | 第41-46页 |
| 3.3.4 褐飞虱几丁质酶基因不同发育阶段的表达模式 | 第46页 |
| 3.3.5 褐飞虱几丁质酶基因的组织特异性表达模式 | 第46-50页 |
| 3.3.6 褐飞虱几丁质酶基因RNA干扰及效果检测 | 第50-55页 |
| 3.4 总结与讨论 | 第55-57页 |
| 第四章 褐飞虱β-N-乙酰己糖胺酶的基因分析及生物学功能 | 第57-73页 |
| 引言 | 第57页 |
| 4.1 实验材料 | 第57-58页 |
| 4.1.1 昆虫 | 第57-58页 |
| 4.1.2 材料与试剂 | 第58页 |
| 4.2 实验方法 | 第58-61页 |
| 4.2.1 褐飞虱β-N-乙酰己糖胺酶基因搜索与序列分析 | 第58页 |
| 4.2.2 总RNA提取与cDNA第一链合成 | 第58页 |
| 4.2.3 实时荧光定量PCR检测基因表达模式 | 第58-59页 |
| 4.2.4 RNA干扰及干扰效果的定量PCR检测 | 第59-61页 |
| 4.3 结果与分析 | 第61-71页 |
| 4.3.1 NlHex基因的确定与结构分析 | 第61-62页 |
| 4.3.2 NlHex的保守结构域分析 | 第62-63页 |
| 4.3.3 Hex基因的系统发育分析 | 第63-65页 |
| 4.3.4 NlHex基因不同发育阶段的表达模式分析 | 第65页 |
| 4.3.5 NlHex基因不同组织的表达模式分析 | 第65-70页 |
| 4.3.6 NlHex基因的RNA干扰与功能分析 | 第70-71页 |
| 4.4 总结与讨论 | 第71-73页 |
| 第五章 褐飞虱几丁质脱乙酰酶的基因分析及生物学功能 | 第73-91页 |
| 引言 | 第73-74页 |
| 5.1 实验材料 | 第74页 |
| 5.1.1 昆虫 | 第74页 |
| 5.1.2 材料与试剂 | 第74页 |
| 5.2 实验方法 | 第74-76页 |
| 5.2.1 褐飞虱CDA基因的鉴定和分析 | 第74-75页 |
| 5.2.3 15种昆虫的CDA基因家族系统发育分析 | 第75页 |
| 5.2.4 总RNA提取与cDNA第一链合成 | 第75页 |
| 5.2.5 实时荧光定量PCR检测NlCDA基因表达模式 | 第75-76页 |
| 5.2.6 RNA干扰及干扰效果的定量PCR检测 | 第76页 |
| 5.3 结果与分析 | 第76-87页 |
| 5.3.1 褐飞虱CDA基因的确定与基因结构分析 | 第76-79页 |
| 5.3.2 预测褐飞虱CDA蛋白的结构域分析 | 第79-81页 |
| 5.3.3 几丁质脱乙酰酶的系统发育分析 | 第81-83页 |
| 5.3.4 褐飞虱CDA基因不同发育阶段表达模式 | 第83页 |
| 5.3.5 褐飞虱CDA基因的组织特异性表达 | 第83页 |
| 5.3.6 褐飞虱CDA的RNA干扰及检测 | 第83-87页 |
| 5.4 总结与讨论 | 第87-91页 |
| 第六章 总结与展望 | 第91-95页 |
| 6.1 总结与讨论 | 第91-94页 |
| 6.1.1 褐飞虱几丁质降解酶系三家族基因的确定与分析 | 第91-92页 |
| 6.1.2 褐飞虱几丁质降解酶系三家族基因的表达模式分析 | 第92页 |
| 6.1.3 褐飞虱几丁质降解酶系三家族基因的生物学功能探索 | 第92页 |
| 6.1.4 褐飞虱几丁质代谢参与酶的“1+5+1+3”模式(图6-1) | 第92-94页 |
| 6.2 进一步研究方向 | 第94页 |
| 6.3 本研究创新点 | 第94-95页 |
| 参考文献 | 第95-104页 |
| 作者简介 | 第104页 |
