| 摘要 | 第1-5页 |
| Abstract | 第5-10页 |
| 1 引言 | 第10-13页 |
| ·cAMP 信号途径与病原物的致病机制 | 第10-11页 |
| ·PKA 基因的功能研究现状 | 第11页 |
| ·研究基因功能的方法 | 第11-12页 |
| ·本研究的目的和意义 | 第12-13页 |
| 2 材料和方法 | 第13-30页 |
| ·试验材料 | 第13-15页 |
| ·主要试剂 | 第13页 |
| ·供试培养基及试剂配制 | 第13-14页 |
| ·主要仪器 | 第14-15页 |
| ·玉米大斑病菌PKA-c 基因的克隆 | 第15-20页 |
| ·引物设计 | 第15页 |
| ·病菌基因组DNA 及总RNA 提取 | 第15-17页 |
| ·第一链cDNA 的合成 | 第17页 |
| ·病菌PKA-c 基因编码区片段的获得 | 第17页 |
| ·PCR 产物的纯化 | 第17-18页 |
| ·PCR 产物与pMD19-T 载体的连接 | 第18页 |
| ·大肠杆菌感受态细胞的制备 | 第18-19页 |
| ·连接产物转化感受态细胞 | 第19页 |
| ·PCR 验证阳性克隆 | 第19页 |
| ·测序与同源性分析 | 第19页 |
| ·碱裂解法小量提取质粒 | 第19-20页 |
| ·基因序列的获得 | 第20-21页 |
| ·模板cDNA 的制备和引物的设计 | 第20页 |
| ·RACE PCR 扩增 | 第20-21页 |
| ·PKA-c 基因全长序列的扩增 | 第21页 |
| ·PKA-c 基因在mRNA 水平的表达规律 | 第21-23页 |
| ·半定量RT-PCR 分析引物的设计 | 第22页 |
| ·cDNA 模板量的确定 | 第22-23页 |
| ·半定量RT-PCR 法分析不同胁迫处理后基因的表达规律 | 第23页 |
| ·PKA-c 基因RNAi 转化子的获得 | 第23-30页 |
| ·PKA-c 基因RNAi 载体的验证 | 第23页 |
| ·PKA-c 基因RNAi 重组载体转化玉米大斑病菌原生质体 | 第23-24页 |
| ·转化子验证及分析 | 第24-28页 |
| ·突变体的生物学性状分析 | 第28-30页 |
| 3 结果与分析 | 第30-50页 |
| ·基因组DNA 和总RNA 的提取 | 第30页 |
| ·PKA- c 基因的获得 | 第30-35页 |
| ·玉米大斑病菌PKA-c 基因编码区片段的扩增 | 第30-31页 |
| ·RACE 对PKA-c 基因已知片段侧翼序列的扩增 | 第31-32页 |
| ·PCR 获得PKA-c 基因DNA 和cDNA 序列 | 第32-35页 |
| ·PKA-c 基因的生物信息学分析 | 第35-39页 |
| ·PKA-c 基因编码蛋白的同源性和聚类分析 | 第35-37页 |
| ·PKA-c 基因编码蛋白的保守结构域分析 | 第37页 |
| ·PKA-c 基因编码氨基酸序列疏水性/亲水性分析 | 第37-38页 |
| ·PKA-c 基因编码蛋白的二级结构预测与分析 | 第38-39页 |
| ·PKA-c 基因在mRNA 水平的表达规律分析 | 第39-42页 |
| ·不同碳源及氮源物质对PKA-c 基因表达的影响 | 第39-40页 |
| ·不同金属离子对PKA-c 基因表达的影响 | 第40-41页 |
| ·高渗胁迫对PKA-c 基因表达的影响 | 第41-42页 |
| ·PKA-c 基因RNAi 转化子的获得 | 第42-50页 |
| ·PKA-c 基因的RNA 干扰载体的验证 | 第42-43页 |
| ·PKA-c 基因RNA 干扰载体转化及筛选 | 第43-44页 |
| ·PKA-c 基因突变体RT-PCR 分析 | 第44-45页 |
| ·PKA-c 基因突变体的Northern 杂交分析 | 第45页 |
| ·PKA-c 基因突变体的菌落形态观察 | 第45-46页 |
| ·PKA-c 基因突变体的孢子数量、萌发以及附着胞形成的观察与统计 | 第46-48页 |
| ·突变体和野生型产生木聚糖酶活性的比较 | 第48页 |
| ·突变体产毒力的测定 | 第48-49页 |
| ·突变体致病力的测定 | 第49-50页 |
| 4 讨论 | 第50-53页 |
| ·影响PKA-c 表达的条件 | 第50-51页 |
| ·PKA-c 序列的获得及生物信息学分析 | 第51页 |
| ·PKA-c 的功能研究 | 第51-53页 |
| 5 结论 | 第53-54页 |
| 参考文献 | 第54-59页 |
| 在读期间发表的学术论文 | 第59-60页 |
| 作者简历 | 第60-61页 |
| 致谢 | 第61-62页 |
