| 中文摘要 | 第6-8页 |
| Abstract | 第8-10页 |
| 中英文缩略词索引 | 第11-12页 |
| 前言 | 第12-14页 |
| 技术路线 | 第14-15页 |
| 实验材料 | 第15-27页 |
| 1. 细胞系 | 第15页 |
| 2. 胰腺组织标本 | 第15页 |
| 3. 质粒 | 第15-17页 |
| 4. 菌种 | 第17页 |
| 5. 主要试剂 | 第17-18页 |
| 6. 主要耗材 | 第18页 |
| 7. 主要仪器设备 | 第18-20页 |
| 8. MIR31HG基因信息、引物、siRNAs、miRNA mimics和inhibitors序列等 | 第20-21页 |
| 9. 溶液配制 | 第21-26页 |
| 10. 生物信息学及数据分析软件 | 第26-27页 |
| 实验方法 | 第27-48页 |
| —.细胞培养 | 第27-28页 |
| 1. 细胞复苏 | 第27页 |
| 2. 细胞传代 | 第27页 |
| 3. 细胞冻存 | 第27页 |
| 4. 细胞转染 | 第27-28页 |
| 二.细胞和组织总RNA提取及real-time qPCR | 第28-30页 |
| 1. 细胞总RNA提取 | 第28页 |
| 2. 组织总RNA提取 | 第28-29页 |
| 3. 实时荧光定量PCR(real-time qPCR) | 第29-30页 |
| 三.细胞功能实验 | 第30-36页 |
| 1. CCK-8实验 | 第30-31页 |
| 2. 软琼脂集落形成实验 | 第31页 |
| 3. EdU免疫荧光实验 | 第31-33页 |
| 4. 细胞周期检测(PI法) | 第33-34页 |
| 5. 细胞凋亡实验(Annexin V/PI法) | 第34页 |
| 6. 细胞划痕试验 | 第34-35页 |
| 7. transwell试验 | 第35-36页 |
| 四.载体构建 | 第36-42页 |
| 1. 构建pcDNA3.1-MIR31HG表达载体 | 第36-40页 |
| 2. 构建pmirGLO-MIR31HG荧光素酶报告基因 | 第40-41页 |
| 3. pGEM-3Zf(+)-MIR31HG载体的构建 | 第41-42页 |
| 五.双荧光素酶报告基因实验 | 第42-43页 |
| 1. 细胞转染 | 第42页 |
| 2. 双荧光素酶活性检测 | 第42-43页 |
| 六.浆核分离 | 第43页 |
| 七.原位杂交 | 第43-44页 |
| 八.提取细胞总蛋白和Western免疫印迹 | 第44-46页 |
| 九.RNA结合蛋白免疫沉淀技术(RIP) | 第46-47页 |
| 十.统计学方法 | 第47-48页 |
| 实验结果 | 第48-72页 |
| 一.MIR31HG在胰腺癌中的表达 | 第48-49页 |
| 1. MIR31HG在基因芯片GSE28735中的表达情况 | 第48页 |
| 2. MIR31HG在胰腺细胞系中的表达 | 第48-49页 |
| 3. MIR31HG在胰腺癌组织中的表达 | 第49页 |
| 二.MIR31HG不具备蛋白编码能力 | 第49-51页 |
| 1. CPAT软件预测MIR31HG编码能力 | 第49-50页 |
| 2. 构建C端Flag载体验证 | 第50-51页 |
| 三.MIR31HG主要定位于细胞浆 | 第51-53页 |
| 1. 浆核分离结果显示MIR3HG主要位于细胞浆 | 第51-52页 |
| 2. 原位杂交结果示MIR31HG定位于细胞浆 | 第52-53页 |
| 四.MIR31HG和miR31各自独立发挥功能 | 第53-56页 |
| 1. miR31位于MIR31HG的内含子区 | 第53-54页 |
| 2. miR31在胰腺癌细胞及组织中的表达及与MIR31HG表达的相关性 | 第54-55页 |
| 3. MIR31HG和miR31各自独立发挥功能 | 第55-56页 |
| 五.MIR31HG对胰腺癌细胞系生物学行为的影响 | 第56-64页 |
| 1. 敲低MIR31HG抑制胰腺癌细胞生长、迁移和侵袭 | 第56-61页 |
| 2. 过表达MIR31HG促进胰腺癌细胞生长和侵袭 | 第61-64页 |
| 六. MIR31HG受miR-193b的负调控 | 第64-70页 |
| 1. 生物信息学软件预测能与MIR31HG结合的miRNA | 第64页 |
| 2. miR-193b在胰腺癌细胞及组织中的表达及与MIR31HG表达的相关性 | 第64-65页 |
| 3. miR-193b负调控MIR31HG的表达 | 第65-67页 |
| 4. miR-193b直接靶向MIR31HG | 第67-69页 |
| 5. miR-193b以Ago2依赖的方式调控MIR31HG | 第69-70页 |
| 七.miR-193b抑制MIR31HG的功能 | 第70-72页 |
| 1. miR-193b抑制MIR31HG促进细胞生长的作用 | 第70页 |
| 2. miR-193b抑制MIR31HG增强细胞侵袭能力的作用 | 第70-72页 |
| 讨论 | 第72-80页 |
| 一.MIR31HG在胰腺癌中表达上调 | 第73-74页 |
| 二.MIR31HG和miR-31各自独立发挥功能 | 第74-75页 |
| 三.MIR31HG在胰腺癌中发挥癌基因作用 | 第75-77页 |
| 四.MIR31HG受miR-193b负调控 | 第77-80页 |
| 结论 | 第80-81页 |
| 参考文献 | 第81-89页 |
| 附录 | 第89-102页 |
| 1. pcDNA3.1-MIR31HG表达载体构建测序结果 | 第89-93页 |
| 2. pmirGLO-MIR31HG双荧光素酶报告基因载体的构建及测序结果 | 第93-99页 |
| 3. pGEM-3Zf(+)-MIR31HG载体的构建及测序结果 | 第99-102页 |
| 文献综述 | 第102-115页 |
| 参考文献 | 第109-115页 |
| 基金资助 | 第115-116页 |
| 个人简历 | 第116-117页 |
| 攻读博士期间发表和待发表的文章 | 第117-118页 |
| 致谢 | 第118-119页 |
