| 摘要 | 第5-7页 |
| Abstract | 第7-8页 |
| 符号及缩略词说明 | 第12-13页 |
| 绪论 | 第13-15页 |
| 第一部分： 胆囊癌差异相关miRNAs的筛选及研究 | 第15-24页 |
| 1.引言 | 第15页 |
| 2.材料与方法 | 第15-18页 |
| 2.1 实验材料 | 第15-16页 |
| 2.1.1 组织标本的收集和保存 | 第15-16页 |
| 2.1.2 Realtime-PCR试剂 | 第16页 |
| 2.1.3 主要实验仪器和设备 | 第16页 |
| 2.2 实验方法 | 第16-18页 |
| 2.2.1 人胆囊癌及正常组织标本的总RNA及miRNA提取 | 第16-17页 |
| 2.2.2 MiRNA芯片筛选人胆囊癌及其癌旁组织中异常表达的miRNA | 第17页 |
| 2.2.3 实时荧光定量PCR检验miRNA芯片结果 | 第17-18页 |
| 2.3 统计分析 | 第18页 |
| 3.实验结果 | 第18-22页 |
| 3.1 人胆囊癌中差异miRNA的表达谱 | 第18-19页 |
| 3.2 MiR-29c-5p在40例胆囊癌新鲜组织中的表达量 | 第19页 |
| 3.3 MiR-29c-5p表达量与胆囊癌患者临床病理特征的相关性 | 第19-21页 |
| 3.4 MiR-29c-5p表达量与胆囊癌患者临床预后的相关性 | 第21-22页 |
| 4.讨论 | 第22-23页 |
| 5.小结 | 第23-24页 |
| 第二部分： MiR-29c-5p调控胆囊癌细胞增殖与浸润转移能力的研究 | 第24-42页 |
| 1.引言 | 第24页 |
| 2.材料与方法 | 第24-33页 |
| 2.1.实验材料 | 第24-28页 |
| 2.1.1 细胞 | 第24页 |
| 2.1.2 动物 | 第24-25页 |
| 2.1.3 主要实验试剂 | 第25-26页 |
| 细胞培养用试剂 | 第25页 |
| 实验主要试剂 | 第25-26页 |
| 细胞增殖及转移能力实验相关试剂 | 第26页 |
| 细胞转染相关试剂 | 第26页 |
| 2.1.4 仪器与设备 | 第26-28页 |
| 2.2.实验方法 | 第28-33页 |
| 2.2.1 细胞培养方法 | 第28页 |
| 2.2.2 MiRNA过表达质粒的构建和转染 | 第28页 |
| 2.2.3 实时荧光定量PCR检测细胞内miRNA表达量 | 第28-29页 |
| 2.2.4 MTT实验检测细胞体外增殖能力 | 第29页 |
| 2.2.5 克隆形成实验 | 第29-30页 |
| 2.2.6 Transwell细胞迁移实验 | 第30页 |
| 2.2.7 细胞划痕愈合实验 | 第30-31页 |
| 2.2.8 裸鼠皮下成瘤实验 | 第31页 |
| 2.2.9 裸鼠尾静脉注射肺转移模型 | 第31页 |
| 2.2.10 免疫印迹（Western Blot）检测 | 第31页 |
| 2.2.11 免疫荧光（ICC）检测 | 第31-32页 |
| 2.2.12 免疫组化（IHC）检测 | 第32页 |
| 2.2.13 统计方法 | 第32-33页 |
| 3.实验结果 | 第33-40页 |
| 3.1 MiR-29c-5p对胆囊癌细胞体外增殖能力的影响 | 第33-34页 |
| 3.2 MiR-29c-5p对胆囊癌细胞体外浸润转移能力的影响 | 第34-36页 |
| 3.3 MiR-29c-5p通过EMT抑制胆囊癌细胞浸润转移 | 第36-37页 |
| 3.4 MiR-29c-5p对胆囊癌细胞体内增殖的影响 | 第37-38页 |
| 3.5 MiR-29c-5p抑制体内肿瘤细胞肺转移 | 第38-40页 |
| 4.讨论 | 第40-41页 |
| 5.小结 | 第41-42页 |
| 第三部分： SPOCK1是miR-29c-5p的直接靶基因 | 第42-57页 |
| 1.引言 | 第42页 |
| 2.材料与方法 | 第42-45页 |
| 2.1 实验材料 | 第42-43页 |
| 2.1.1 组织标本的收集和保存 | 第42-43页 |
| 2.1.2 慢病毒载体构建及细胞转染相关试剂 | 第43页 |
| 2.1.3 其余实验试剂参见第二部分―材料与方法 | 第43页 |
| 2.1.4 主要实验仪器 | 第43页 |
| 2.2 实验方法 | 第43-45页 |
| 2.2.1 生物信息学预测miR-29c-5p靶基因 | 第43页 |
| 2.2.2 双荧光素酶报告基因实验 | 第43-44页 |
| 2.2.3 免疫组化染色及阳性评分 | 第44页 |
| 2.2.4 质粒构建与转染 | 第44-45页 |
| 2.2.5 慢病毒介导RNA干扰 | 第45页 |
| 2.2.6 主要Real-time PCR引物列表 | 第45页 |
| 2.2.7 统计学分析 | 第45页 |
| 3.实验结果 | 第45-55页 |
| 3.1 MiR-29c-5p靶基因的预测 | 第45-47页 |
| 3.2 MiR-29c-5p能够调控靶基因SPOCK1的蛋白表达量 | 第47页 |
| 3.3 SPOCK1与miR-29c-5p表达量在28例人胆囊癌组织中的相关性 | 第47-48页 |
| 3.4 SPOCK1与胆囊癌患者临床病理及预后的关系 | 第48-50页 |
| 3.5 SPOCK1通过诱导EMT在体外促进胆囊癌细胞侵袭转移 | 第50-53页 |
| 3.6 MiR-29c-5p抑制胆囊癌细胞侵袭转移和上皮间质转化发生依赖于SPOCK1 | 第53-55页 |
| 4.讨论 | 第55-56页 |
| 5.小结 | 第56-57页 |
| 全文小结及展望 | 第57-58页 |
| 参考文献 | 第58-61页 |
| 综述 | 第61-69页 |
| 参考文献 | 第65-69页 |
| 致谢 | 第69-70页 |
| 攻读学位期间发表的论文 | 第70-71页 |
| 英语全文翻译 | 第71-115页 |
| 八年制学位论文要求 | 第115-116页 |
| 上海交通大学学位论文答辩决议书 | 第116页 |
