| 摘要 | 第12-14页 |
| Abstract | 第14-15页 |
| 第一章 前言 | 第16-22页 |
| 1.1 无机焦磷酸化酶的研究进展 | 第16-17页 |
| 1.2 无机焦磷酸化酶对植物生理的调节 | 第17-19页 |
| 1.2.1 无机焦磷酸化酶对细胞糖类代谢的影响 | 第18页 |
| 1.2.2 无机焦磷酸化酶在植物抗逆过程中的积极作用 | 第18-19页 |
| 1.3 CRISPR/Cas9在水稻基因敲除中的应用 | 第19-20页 |
| 1.3.1 CRISPR/Cas9技术的研究进展 | 第19-20页 |
| 1.4 立题的目的与意义 | 第20-21页 |
| 1.5 技术路线 | 第21-22页 |
| 第二章 小盐芥ThPP1基因的克隆与生物信息学分析 | 第22-29页 |
| 2.1 试验材料 | 第22-23页 |
| 2.1.1 小盐芥种子与野生型水稻 | 第22页 |
| 2.1.2 菌液及试剂 | 第22页 |
| 2.1.3 引物合成及相关测序 | 第22页 |
| 2.1.4 培养基的配制 | 第22-23页 |
| 2.1.5 仪器设备 | 第23页 |
| 2.1.6 引物设计及序列分析软件 | 第23页 |
| 2.2 试验方法 | 第23-25页 |
| 2.2.1 小盐芥总RNA的提取与检测 | 第23页 |
| 2.2.2 cDNA的合成及ThPP1的克隆 | 第23-24页 |
| 2.2.3 PCR产物的回收与纯化 | 第24-25页 |
| 2.2.4 质粒DNA的提取与序列测定 | 第25页 |
| 2.3 结果分析 | 第25-27页 |
| 2.3.1 小盐芥ThPP1基因的克隆 | 第25页 |
| 2.3.2 小盐芥无机焦磷酸化酶ThPP1基因的进化树分析 | 第25-26页 |
| 2.3.3 小盐芥无机焦磷酸化酶ThPP1的结构域功能分析 | 第26-27页 |
| 2.4 小结 | 第27-29页 |
| 第三章 小盐芥ThPP1的亚细胞定位及碱胁迫下的表达模式 | 第29-36页 |
| 3.1 实验材料 | 第29-30页 |
| 3.1.1 菌种及载体 | 第29页 |
| 3.1.2 植物材料 | 第29页 |
| 3.1.3 试剂与设备 | 第29页 |
| 3.1.4 培养基配制 | 第29-30页 |
| 3.2 试验方法 | 第30-33页 |
| 3.2.1 亚细胞定位载体构建 | 第30页 |
| 3.2.2 基因枪法转化洋葱表皮细胞 | 第30-31页 |
| 3.2.3 小盐芥ThPP1基因在碱胁迫下表达模式分析 | 第31-33页 |
| 3.3 结果分析 | 第33-35页 |
| 3.3.1 ThPP1基因的亚细胞定位载体构建 | 第33-35页 |
| 3.3.2 胁迫处理下小盐芥ThPP1基因的表达模式分析 | 第35页 |
| 3.4 小结 | 第35-36页 |
| 第四章 植物表达载体的构建并转化水稻及其耐碱性分析 | 第36-55页 |
| 4.1 实验材料 | 第36-37页 |
| 4.1.1 转化材料 | 第36页 |
| 4.1.2 试剂与酶 | 第36页 |
| 4.1.3 营养液及试剂配制 | 第36-37页 |
| 4.1.4 仪器设备 | 第37页 |
| 4.2 试验方法 | 第37-43页 |
| 4.2.1 构建植物表达载体 | 第37-39页 |
| 4.2.2 载体转化农杆菌GV3101 | 第39页 |
| 4.2.3 GV3101转化水稻愈伤组织 | 第39页 |
| 4.2.4 转基因水稻株系的检测 | 第39-40页 |
| 4.2.5 转基因水稻植株的碱胁迫处理 | 第40页 |
| 4.2.6 小盐芥ThPP1基因在水稻中表达模式分析 | 第40-41页 |
| 4.2.7 转录组测序分析 | 第41-42页 |
| 4.2.8 生理指标测定 | 第42-43页 |
| 4.2.9 数据统计分析 | 第43页 |
| 4.3 结果分析 | 第43-54页 |
| 4.3.1 植物表达载体构建 | 第43-44页 |
| 4.3.2 转基因水稻株系的筛选与检测 | 第44-45页 |
| 4.3.3 野生型与转基因水稻在碱胁迫下的表型特征 | 第45-46页 |
| 4.3.4 碱胁迫下小盐芥ThPP1基因在水稻中的表达模式 | 第46页 |
| 4.3.5 碱胁迫对野生型和转基因型水稻叶绿素含量和光合作用的影响 | 第46-48页 |
| 4.3.6 碱胁迫对野生型和转基因型水稻蔗糖和淀粉含量的影响 | 第48-49页 |
| 4.3.7 碱胁迫对野生型和转基因型水稻可溶性糖和脯氨酸含量的影响 | 第49-50页 |
| 4.3.8 碱胁迫对野生型和转基因型水稻丙二醛和钠钾比的影响 | 第50-51页 |
| 4.3.9 水稻基因组中差异表达分析 | 第51-52页 |
| 4.3.10 不同表达基因的GO富集分析 | 第52-53页 |
| 4.3.11 DEGs通路分析 | 第53-54页 |
| 4.4 小结 | 第54-55页 |
| 第五章 小盐芥ThPP1无机焦磷酸化酶基因互作蛋白的筛选 | 第55-65页 |
| 5.1 实验材料 | 第55-56页 |
| 5.1.1 载体与菌株 | 第55页 |
| 5.1.2 酶、试剂与设备 | 第55页 |
| 5.1.3 培养基及溶液配制 | 第55-56页 |
| 5.2 材料方法 | 第56-61页 |
| 5.2.1 ThPP1载体构建 | 第56-58页 |
| 5.2.2 载体共转化酵母菌NMY51 | 第58-59页 |
| 5.2.3 互作蛋白序列的获得 | 第59-60页 |
| 5.2.4 16 | 第60-61页 |
| 5.3 结果分析 | 第61-64页 |
| 5.3.1 ThPP1基因互作蛋白的初步筛选 | 第61-62页 |
| 5.3.2 靶蛋白与ThPP1基因的互作验证 | 第62-63页 |
| 5.3.3 16 | 第63-64页 |
| 5.4 小结 | 第64-65页 |
| 第六章 CRISPR/Cas9介导的水稻无机焦磷酸化酶OsPP1基因编辑 | 第65-72页 |
| 6.1 试验材料 | 第65页 |
| 6.1.1 植物材料、载体与菌株 | 第65页 |
| 6.1.2 酶及试剂 | 第65页 |
| 6.2 试验方法 | 第65-67页 |
| 6.2.1 目标基因的选择与载体构建 | 第65-67页 |
| 6.2.2 阳性转基因植株的获得及验证 | 第67页 |
| 6.3 结果分析 | 第67-70页 |
| 6.3.1 氨基酸序列比对 | 第67-68页 |
| 6.3.2 OsPP1基因靶位点位置及PCR检测 | 第68-69页 |
| 6.3.3 核苷酸序列比对与峰图分析 | 第69页 |
| 6.3.4 突变株OsPP1蛋白序列分析 | 第69-70页 |
| 6.4 小结 | 第70-72页 |
| 第七章 讨论与结论 | 第72-75页 |
| 7.1 讨论 | 第72-73页 |
| 7.2 结论 | 第73-75页 |
| 参考文献 | 第75-83页 |
| 致谢 | 第83-84页 |
| 攻读学位期间发表的文章 | 第84页 |
