| 摘要 | 第4-5页 |
| ABSTRACT | 第5-6页 |
| 一 引言 | 第9-13页 |
| 1.1 芽孢杆菌生物防治植物病害概述 | 第9-10页 |
| 1.2 β-1,3-葡聚糖酶概述 | 第10-11页 |
| 1.2.1 β-1,3-葡聚糖酶 | 第10页 |
| 1.2.2 β-1,3-葡聚糖酶在植物致病真菌的防治中的作用 | 第10-11页 |
| 1.2.3 β-1,3-葡聚糖酶的活性测定 | 第11页 |
| 1.2.4 β-1,3-葡聚糖酶的分子生物学研究 | 第11页 |
| 1.3 本论文的研究目的和内容 | 第11-13页 |
| 1.3.1 研究目的 | 第11-12页 |
| 1.3.2 研究内容 | 第12-13页 |
| 二 材料与方法 | 第13-29页 |
| 2.1 材料 | 第13-19页 |
| 2.1.1 菌种和载体 | 第13页 |
| 2.1.2 培养基 | 第13-14页 |
| 2.1.3 主要试剂 | 第14页 |
| 2.1.4 主要仪器设备 | 第14-15页 |
| 2.1.5 主要溶液 | 第15-19页 |
| 2.2 实验方法 | 第19-29页 |
| 2.2.1 β-1,3-葡聚糖酶酶活性的测定 | 第19-21页 |
| 2.2.2 β-1,3-葡聚糖酶基因的克隆 | 第21-22页 |
| 2.2.3 克隆载体的构建和筛选 | 第22-23页 |
| 2.2.4 bgl基因的生物信息学分析 | 第23-24页 |
| 2.2.5 表达载体pGEX-4T-1-bgl的构建及转化 | 第24页 |
| 2.2.6 重组表达载体pGEX-4T-1-bgl的筛选及鉴定 | 第24-25页 |
| 2.2.7 β-1,3-葡聚糖酶基因在大肠杆菌中的诱导表达 | 第25页 |
| 2.2.8 融合蛋白SDS-PAGE电泳检测 | 第25-26页 |
| 2.2.9 β-1,3-葡聚糖酶基因在大肠杆菌中诱导表达条件的优化 | 第26-27页 |
| 2.2.10 融合蛋白酶活力的检测 | 第27页 |
| 2.2.11 抑菌率的检测 | 第27-29页 |
| 三 结果与分析 | 第29-44页 |
| 3.1 β-1,3-葡聚糖酶基因的克隆 | 第29-30页 |
| 3.1.1 萎缩芽孢杆菌SF1全基因组的提取 | 第29页 |
| 3.1.2 β-1,3-葡聚糖酶基因的克隆 | 第29-30页 |
| 3.2 克隆载体pMD-19-T-bgl的构建和筛选 | 第30-31页 |
| 3.3 β-1,3-葡聚糖酶基因序列生物信息学分析 | 第31-34页 |
| 3.3.1 bgl基因序列分析 | 第31页 |
| 3.3.2 BGL亲水性/疏水性分析 | 第31-32页 |
| 3.3.3 bgl基因磷酸化位点的预测 | 第32-33页 |
| 3.3.4 bgl基因BLASTN序列比对 | 第33页 |
| 3.3.5 bgl基因CLUSTALX分析 | 第33-34页 |
| 3.3.6 bgl基因的进化分析 | 第34页 |
| 3.4 表达载体pGEX-4T-1-bgl的构建和筛选 | 第34-35页 |
| 3.5 bgl基因在大肠杆菌中的诱导表达 | 第35-36页 |
| 3.6 β-1,3-葡聚糖酶基因在大肠杆菌中诱导表达条件的优化 | 第36-40页 |
| 3.6.1 IPTG浓度对表达的影响 | 第36-37页 |
| 3.6.2 诱导时间对目的产物表达的影响 | 第37-38页 |
| 3.6.3 诱导时机对目的产物表达的影响 | 第38-39页 |
| 3.6.4 诱导温度对目的产物表达的影响 | 第39-40页 |
| 3.7 工程菌株和SF1 β-1,3-葡聚糖酶酶活性的测定 | 第40-44页 |
| 3.7.1 葡萄糖标准曲线的绘制 | 第40-41页 |
| 3.7.2 菌株SF1和NDM-1 β-1,3-葡聚糖酶酶活性曲线 | 第41-42页 |
| 3.7.3 菌株SF1和NDM-1抑菌情况比较 | 第42-44页 |
| 四 讨论 | 第44-45页 |
| 五 结论 | 第45-46页 |
| 参考文献 | 第46-48页 |
| 附录 | 第48-50页 |
| 附录1 bgl基因序列测定结果 | 第48-49页 |
| 附录2 在线工具汇总 | 第49-50页 |
| 致谢 | 第50页 |
