| 英文缩写一览表 | 第7-9页 |
| 摘要 | 第9-11页 |
| Abstract | 第11-12页 |
| 第1章 综述 | 第13-23页 |
| 1.1 结核分枝杆菌中脂解酶 | 第14-20页 |
| 1.1.1 Lip家族 | 第14-15页 |
| 1.1.2 脂酶和酯酶的区别 | 第15-16页 |
| 1.1.3 磷脂酶 | 第16-17页 |
| 1.1.4 β-内酰胺家族 | 第17-18页 |
| 1.1.5 角质酶家族 | 第18页 |
| 1.1.6 PE/PPE家族 | 第18-19页 |
| 1.1.7 甘油一酸酯脂酶家族 | 第19-20页 |
| 1.2 脂酶实验系统 | 第20-23页 |
| 1.2.1 分光光度和荧光实验 | 第20-21页 |
| 1.2.2 滴定分析 | 第21页 |
| 1.2.3 表面压力控制 | 第21-23页 |
| 第2章 前言 | 第23-25页 |
| 2.1 研究目的和意义 | 第23-24页 |
| 2.2 研究范围和内容 | 第24-25页 |
| 第3章 实验材料和方法 | 第25-39页 |
| 3.1 实验材料 | 第25-29页 |
| 3.1.1 基因克隆、表达实验材料 | 第25-26页 |
| 3.1.2 蛋白纯化、透析、浓度测定实验材料 | 第26-27页 |
| 3.1.3 酶学特性测定实验材料 | 第27-28页 |
| 3.1.4 MS_pALACE-Rv1400c重组耻垢分枝杆菌的构建、鉴定及压力反应测定实验材料 | 第28-29页 |
| 3.2 实验方法 | 第29-39页 |
| 3.2.1 分枝杆菌中LipI蛋白序列同源性比较 | 第29页 |
| 3.2.2 结核分枝杆菌HSL家族蛋白多序列比较和三级结构建立 | 第29页 |
| 3.2.3 结核分枝杆菌脂解酶进化树建立 | 第29页 |
| 3.2.4 Rv1400c基因体外扩增 | 第29-30页 |
| 3.2.5 BL21_pET28a-Rv1400c重组表达载体的构建 | 第30页 |
| 3.2.6 pMD-19T-Rv1400c质粒获得 | 第30-31页 |
| 3.2.7 双酶切及pET28a-Rv1400c阳性验证 | 第31页 |
| 3.2.8 获得BL21-pET28a-Rv1400c菌株 | 第31-32页 |
| 3.2.9 蛋白表达 | 第32页 |
| 3.2.10 重组蛋白纯化 | 第32-33页 |
| 3.2.11 酶活实验 | 第33页 |
| 3.2.12 pH和温度对其活性的影响 | 第33-34页 |
| 3.2.13 底物特异性 | 第34页 |
| 3.2.14 酶动力学活性测定 | 第34页 |
| 3.2.15 金属离子与表面活性剂对酶活性的影响 | 第34页 |
| 3.2.16 活性位点的点突变验证 | 第34-35页 |
| 3.2.17 pALACE-Rv1400c重组载体的构建 | 第35页 |
| 3.2.18 重组质粒电转感受态耻垢分枝杆菌 | 第35-36页 |
| 3.2.19 Western Bloting检测MS_pALACE-Rv1400c诱导表达LipI蛋白 | 第36页 |
| 3.2.20 乙酰胺诱导后，LipI对耻垢分枝杆菌生长的影响 | 第36-37页 |
| 3.2.21 H_2O_2、SDS处理条件下，LipI蛋白对耻垢分枝杆菌生长的影响 | 第37页 |
| 3.2.22 低pH、PBS处理条件下，LipI蛋白对耻垢分枝杆菌生长的影响 | 第37-39页 |
| 第4章 结果与讨论 | 第39-53页 |
| 4.1 物理信息学分析 | 第39页 |
| 4.2 分枝杆菌中LipI蛋白序列同源性和一致性比较 | 第39-40页 |
| 4.3 进化关系分析 | 第40-41页 |
| 4.4 HSL亚家族多序列比较结果及分析 | 第41-42页 |
| 4.5 Rv1400c基因体外扩增结果及DH5α-pET28a-Rv1400c阳性鉴定 | 第42页 |
| 4.6 蛋白表达 | 第42-43页 |
| 4.7 纯化结果 | 第43-44页 |
| 4.8 酶活性测定 | 第44页 |
| 4.9 底物特异性 | 第44-45页 |
| 4.10 LipI的最适pH最适温度及其稳定性 | 第45-46页 |
| 4.11 酶动力学测定 | 第46页 |
| 4.12 金属离子和表面活性剂对酶活性的影响 | 第46-47页 |
| 4.13 定点突变结果验证 | 第47页 |
| 4.14 催化活性的验证 | 第47-48页 |
| 4.15 LipI蛋白三级结构 | 第48-49页 |
| 4.16 pALACE(His)-Rv1400c重组蛋白在耻垢分枝杆菌中成功表达 | 第49-50页 |
| 4.17 Rv1400c蛋白的表达没有影响重组耻垢分枝杆菌的生长 | 第50页 |
| 4.18 Rv1400c的过表达不改变耻垢分枝杆菌对压力环境（SDS，H_2O_2，Low pH，PBS）的反应 | 第50-53页 |
| 第5章 结论与展望 | 第53-55页 |
| 参考文献 | 第55-63页 |
| 致谢 | 第63-65页 |
| 在学期间发表的文章 | 第65页 |
