| 中文摘要 | 第3-5页 |
| 英文摘要 | 第5-6页 |
| 第一章 引言 | 第12-20页 |
| 1. SBP-box基因研究进展 | 第12-14页 |
| 1.1 SBP-box基因的结构 | 第12-13页 |
| 1.2 SBP-box基因的功能 | 第13-14页 |
| 2. MicroRNA研究进展 | 第14-15页 |
| 2.1 MicroRNA的发现 | 第14页 |
| 2.2 miR156的功能 | 第14-15页 |
| 3. 普通烟草SBP-box基因的研究现状 | 第15-18页 |
| 3.1 烟草简介 | 第15页 |
| 3.2 二倍体化 | 第15-16页 |
| 3.3 普通烟草的亲本 | 第16页 |
| 3.4 普通烟草的二倍体化进程 | 第16-18页 |
| 4. 本研究的主要内容和意义 | 第18-20页 |
| 第二章 普通烟草SBP-box基因编码序列的克隆 | 第20-46页 |
| 1. 材料与主要试剂 | 第20-21页 |
| 1.1 植物材料与菌株 | 第20页 |
| 1.2 试剂与仪器 | 第20-21页 |
| 2. 方法 | 第21-28页 |
| 2.1 普通烟草SBP-box基因的计算机搜索 | 第21页 |
| 2.2 普通烟草SBP-box基因编码序列的克隆 | 第21-26页 |
| 2.2.1 引物设计 | 第21-23页 |
| 2.2.2 总RNA的提取 | 第23-24页 |
| 2.2.3 cDNA第一链的合成 | 第24-25页 |
| 2.2.4 NtabSPL基因编码序列的PCR扩增 | 第25-26页 |
| 2.3 PCR产物的回收 | 第26页 |
| 2.4 质粒DNA的提取 | 第26-27页 |
| 2.5 目的片段和质粒载体的双酶切 | 第27页 |
| 2.6 NtabSPL过表达载体的构建 | 第27-28页 |
| 2.6.1 连接 | 第27页 |
| 2.6.2 大肠杆菌DH5α感受态细胞的制备 | 第27-28页 |
| 2.6.3 受体细胞的转化 | 第28页 |
| 2.7 抗性菌落的PCR鉴定 | 第28页 |
| 3. 结果与讨论 | 第28-46页 |
| 3.1 普通烟草NtabSPL基因的计算机搜索 | 第28-30页 |
| 3.2 NtabSPL2基因编码序列的克隆 | 第30-31页 |
| 3.2.1 菌落PCR鉴定 | 第30-31页 |
| 3.2.2 NtabSPL2基因编码序列的测定 | 第31页 |
| 3.3 NtabSPL3基因编码序列的克隆 | 第31-33页 |
| 3.3.1 菌落PCR鉴定 | 第31-32页 |
| 3.3.2 NtabSPL3基因编码序列的测定 | 第32-33页 |
| 3.4 NtabSPL6基因编码序列的克隆 | 第33-40页 |
| 3.4.1 菌落PCR鉴定 | 第33-36页 |
| 3.4.2 NtabSPL6基因编码序列的测定 | 第36-40页 |
| 3.5 NtabSPL7基因编码序列的克隆 | 第40-41页 |
| 3.5.1 菌落PCR鉴定 | 第40页 |
| 3.5.2 NtabSPL7基因编码序列的测定 | 第40-41页 |
| 3.6 NtabSPL8基因编码序列的克隆 | 第41-42页 |
| 3.6.1 菌落PCR鉴定 | 第41-42页 |
| 3.6.2 NtabSPL8基因编码序列的测定 | 第42页 |
| 3.7 NtabSPL9基因编码序列的克隆 | 第42-44页 |
| 3.7.1 菌落PCR鉴定 | 第42-43页 |
| 3.7.2 NtabSPL9基因编码序列的测定 | 第43-44页 |
| 3.8 NtabSPL13基因编码序列的克隆 | 第44-46页 |
| 3.8.1 菌落PCR鉴定 | 第44页 |
| 3.8.2 NtabSPL13基因编码序列的测定 | 第44-46页 |
| 第三章 NtabSPL基因的系统进化分析 | 第46-62页 |
| 1. 生物信息学方法 | 第46-47页 |
| 2. 结果与讨论 | 第47-62页 |
| 2.1 NtabSPL基因的结构 | 第47-48页 |
| 2.2 其他烟草的SPL基因 | 第48-49页 |
| 2.3 NtabSPL基因的起源 | 第49-51页 |
| 2.4 来自林烟草祖先的NtabSPL基因 | 第51-52页 |
| 2.5 来自绒烟草祖先的NtabSPL基因 | 第52-58页 |
| 2.6 普通烟草、番茄和拟南芥SBP蛋白的系统进化分析 | 第58-62页 |
| 第四章 过表达miR156对普通烟草开花时间和NtabSPL基因表达水平的影响 | 第62-74页 |
| 1. 材料与主要试剂 | 第62-63页 |
| 1.1 植物材料 | 第62页 |
| 1.2 宿主菌和质粒载体 | 第62页 |
| 1.3 主要试剂 | 第62-63页 |
| 2. 方法 | 第63-69页 |
| 2.1 AtPri-miR156a基因的克隆 | 第63-64页 |
| 2.1.1 引物设计 | 第63-64页 |
| 2.1.2 拟南芥基因组DNA的提取(CTAB法) | 第64页 |
| 2.1.3 AtPri-miR156a基因的PCR扩增 | 第64页 |
| 2.2 目的片段和质粒载体的双酶切 | 第64-65页 |
| 2.3 AtPri-miR156a过表达载体的构建 | 第65-66页 |
| 2.4 农杆菌LBA4404感受态细胞的制备 | 第66页 |
| 2.5 农杆菌感受态细胞的转化(冻融法) | 第66页 |
| 2.6 农杆菌的菌落PCR鉴定 | 第66页 |
| 2.7 转基因烟草植株的再生 | 第66-67页 |
| 2.8 转基因烟草的分子生物学鉴定 | 第67页 |
| 2.9 转基因烟草的表型观察 | 第67-68页 |
| 2.10 转基因烟草中NtabSPL3a和NtabSPL6的表达分析 | 第68-69页 |
| 3. 结果与讨论 | 第69-74页 |
| 3.1 大肠杆菌抗性克隆的菌落PCR鉴定 | 第69页 |
| 3.2 农杆菌抗性克隆的菌落PCR鉴定 | 第69-70页 |
| 3.3 转基因烟草植株的再生 | 第70-71页 |
| 3.4 转基因烟草植株的分子生物学鉴定 | 第71页 |
| 3.5 转基因烟草的表型观察 | 第71-72页 |
| 3.6 转基因烟草中NtabSPL3a基因的表达水平 | 第72-73页 |
| 3.7 转基因烟草中NtabSPL6基因的表达水平 | 第73-74页 |
| 结论 | 第74-78页 |
| 参考文献 | 第78-85页 |
| 附录 | 第85-86页 |
| 攻读硕士学位期间取得的学术成果 | 第86-87页 |
| 致谢 | 第87页 |
