| 中文摘要 | 第16-19页 |
| ABSTRACT | 第19-23页 |
| 第一章 文献综述 | 第24-49页 |
| 1 衰老 | 第24-33页 |
| 1.1 衰老理论 | 第24-28页 |
| 1.2 热量限制 | 第28-31页 |
| 1.3 热量限制模拟 | 第31-33页 |
| 2 胰蛋白酶抑制剂概述 | 第33-35页 |
| 2.1 荞麦胰蛋白酶抑制剂 | 第34-35页 |
| 3 秀丽隐杆线虫 | 第35-40页 |
| 3.1 秀丽隐杆线虫中衰老调控相关通路 | 第37-40页 |
| 4 论文研究的背景及目的意义 | 第40-41页 |
| 5 参考文献 | 第41-49页 |
| 第二章 rBTI对C. elegans健康寿命的影响 | 第49-60页 |
| 1 实验材料 | 第49-50页 |
| 1.1 线虫品系 | 第49页 |
| 1.2 实验试剂及仪器 | 第49-50页 |
| 2 实验方法 | 第50-54页 |
| 2.1 相关培养基及缓冲液配置 | 第50-51页 |
| 2.2 E. coli OP50培养 | 第51页 |
| 2.3 E. coli OP50增殖检测 | 第51-52页 |
| 2.4 秀丽隐杆线虫培养及相关方法 | 第52-54页 |
| 2.5 统计分析 | 第54页 |
| 3 实验结果 | 第54-58页 |
| 3.1 rBTI对E. coli OP50增殖影响 | 第54页 |
| 3.2 rBTI对C. elegans寿命的影响及最佳用药浓度确定 | 第54-56页 |
| 3.3 rBTI对C. elegans衰老的影响 | 第56-57页 |
| 3.4 rBTI对C. elegans摄食及行为能力影响 | 第57-58页 |
| 4 讨论 | 第58页 |
| 5 参考文献 | 第58-60页 |
| 第三章 rBTI延长C. elegans寿命的作用方式 | 第60-80页 |
| 1 实验材料 | 第60-62页 |
| 1.1 线虫品系 | 第60页 |
| 1.2 实验试剂及仪器 | 第60-62页 |
| 2 实验方法 | 第62-67页 |
| 2.1 匀浆缓冲液配置 | 第62页 |
| 2.2 琼脂糖固定垫片的制作 | 第62页 |
| 2.3 抗氧化酶活性检测 | 第62-63页 |
| 2.4 胡桃醌氧化应激实验 | 第63页 |
| 2.5 mtDNA损伤检测 | 第63-64页 |
| 2.6 ROS定量 | 第64-65页 |
| 2.7 AMP/ATP比率检测 | 第65页 |
| 2.8 呼吸速率检测 | 第65页 |
| 2.9 线虫总RNA提取 | 第65-66页 |
| 2.10 实时定量PCR | 第66-67页 |
| 2.11 DAF-16 定位检测 | 第67页 |
| 2.12 突变体线虫品系寿命检测 | 第67页 |
| 2.13 统计分析 | 第67页 |
| 3 实验结果 | 第67-74页 |
| 3.1 rBTI对C. elegans抗氧化应激能力及氧化损伤积累的影响 | 第67-68页 |
| 3.2 rBTI对C.elegans内源性抗氧化防御系统的影响 | 第68-70页 |
| 3.3 rBTI对C. elegans体内AMP:ATP比率及呼吸作用影响 | 第70页 |
| 3.4 ROS信号在rBTI延长寿命中的作用 | 第70页 |
| 3.5 rBTI下调IIS通路，增强DAF-16 转录活性 | 第70-73页 |
| 3.6 daf-2、daf-16 在rBTI介导的寿命延长中的作用 | 第73-74页 |
| 3.7 rBTI对daf-2 突变体中ROS的影响 | 第74页 |
| 4 讨论 | 第74-77页 |
| 5 参考文献 | 第77-80页 |
| 第四章 rBTI对C. elegans相关代谢的影响 | 第80-95页 |
| 1 实验材料 | 第80-81页 |
| 1.1 线虫品系 | 第80页 |
| 1.2 实验试剂及仪器 | 第80-81页 |
| 2 实验方法 | 第81-88页 |
| 2.1 2-NBDG摄取 | 第81-82页 |
| 2.2 能量代谢相关酶活性检测 | 第82-85页 |
| 2.3 油红染色 | 第85-86页 |
| 2.4 线虫总RNA提取 | 第86页 |
| 2.5 实时定量PCR | 第86-87页 |
| 2.6 荧光显微观察 | 第87页 |
| 2.7 统计学分析 | 第87-88页 |
| 3 实验结果 | 第88-92页 |
| 3.1 rBTI对C. elegans葡萄糖摄取的影响 | 第88页 |
| 3.2 rBTI对C. elegans糖酵解的影响 | 第88-89页 |
| 3.3 rBTI对C. elegans脂肪酶活性及脂肪积累影响 | 第89-90页 |
| 3.4 rBTI对C. elegans自噬影响 | 第90-92页 |
| 4 讨论 | 第92-93页 |
| 5 参考文献 | 第93-95页 |
| 第五章 rBTI对C.elegans寿命的影响与其分子结构的关系 | 第95-106页 |
| 1 实验材料 | 第95-96页 |
| 1.1 线虫品系 | 第95页 |
| 1.2 实验试剂及仪器 | 第95-96页 |
| 2 实验方法 | 第96-98页 |
| 2.1 rBTI突变体质粒的构建 | 第96-97页 |
| 2.2 突变体的原核表达及纯化 | 第97页 |
| 2.3 胰蛋白酶抑制活性分析 | 第97-98页 |
| 2.4 圆二色光谱分析 | 第98页 |
| 2.5 C.elegans寿命检测 | 第98页 |
| 2.6 DAF-16 定位检测 | 第98页 |
| 2.7 实时定量PCR | 第98页 |
| 3 实验结果 | 第98-104页 |
| 3.1 rBTI及其突变体的表达与纯化 | 第98-99页 |
| 3.2 rBTI及其突变体抑制活性鉴定 | 第99页 |
| 3.3 圆二色光谱对比分析 | 第99-100页 |
| 3.4 rBTI及其突变体对C. elegans寿命的影响 | 第100-102页 |
| 3.5 rBTI及其突变体对转录因子DAF-16 的影响 | 第102-104页 |
| 4 讨论 | 第104-105页 |
| 5 参考文献 | 第105-106页 |
| 第六章 rBTI对衰老相关疾病的影响及其机制 | 第106-122页 |
| 1 实验材料 | 第106-107页 |
| 1.1 线虫品系 | 第106页 |
| 1.2 实验试剂及仪器 | 第106-107页 |
| 2 实验方法 | 第107-109页 |
| 2.1 寿命检测 | 第107页 |
| 2.2 线虫僵化检测 | 第107-108页 |
| 2.3 RNA提取及实时定量PCR | 第108页 |
| 2.4 Western blotting | 第108页 |
| 2.5 免疫荧光分析 | 第108页 |
| 2.6 硫磺素S染色 | 第108页 |
| 2.7 蛋白酶体活性检测 | 第108-109页 |
| 2.8 溶酶体含量检测 | 第109页 |
| 2.9 RNAi相关方法 | 第109页 |
| 2.10 统计学方法 | 第109页 |
| 3 实验结果 | 第109-118页 |
| 3.1 rBTI延长了AD模型线虫寿命 | 第109-110页 |
| 3.2 rBTI延缓了AD模型线虫僵化表型 | 第110-111页 |
| 3.3 rBTI降低了AD模型线虫中Aβ 积累 | 第111-113页 |
| 3.4 rBTI促进了AD模型线虫自噬-溶酶体降解途径的加强 | 第113-114页 |
| 3.5 自噬对于rBTI介导的僵化表型减缓是必须的 | 第114-115页 |
| 3.6 rBTI增强了AD模型线虫中DAF-16 的转录活性 | 第115-117页 |
| 3.7 rBTI对HD模型线虫的影响 | 第117-118页 |
| 4 讨论 | 第118-120页 |
| 5 参考文献 | 第120-122页 |
| 小结与展望 | 第122-124页 |
| 缩略词 | 第124-125页 |
| 攻读博士学位期间取得的研究成果 | 第125-127页 |
| 致谢 | 第127-128页 |
| 个人简况及联系方式 | 第128页 |
