| 摘要 | 第4-6页 |
| ABSTRACT | 第6页 |
| 第一章 前言 | 第9-21页 |
| 1.1 丝状真菌表达系统 | 第9-16页 |
| 1.1.1 丝状真菌表达系统应用于工业酶生产 | 第9页 |
| 1.1.2 阻断NHEJ途径提高丝状真菌基因打靶率 | 第9-12页 |
| 1.1.3 丝状真菌遗传转化筛选标记 | 第12-16页 |
| 1.2 真菌蛋白分泌途径改造研究进展 | 第16-20页 |
| 1.2.1 真菌蛋白分泌途径 | 第16-18页 |
| 1.2.2 改造分泌途径提高真菌外源蛋白产量 | 第18-20页 |
| 1.3 课题目的、意义 | 第20-21页 |
| 第二章 材料与方法 | 第21-41页 |
| 2.1 材料 | 第21-27页 |
| 2.1.1 菌株与质粒 | 第21页 |
| 2.1.2 所用引物及其用途 | 第21页 |
| 2.1.3 酶和化学试剂 | 第21-22页 |
| 2.1.4 所用培养基与微量试剂 | 第22-25页 |
| 2.1.5 所用溶液 | 第25-27页 |
| 2.2 方法 | 第27-41页 |
| 2.2.1 PCR反应 | 第27-29页 |
| 2.2.2 DNA纯化回收 | 第29页 |
| 2.2.3 质粒的提取 | 第29页 |
| 2.2.4 DNA片段连接T载体 | 第29页 |
| 2.2.5 大肠杆菌Trans1-T1感受态细胞的转化 | 第29页 |
| 2.2.6 质粒的构建 | 第29-30页 |
| 2.2.7 真菌总RNA的提取 | 第30页 |
| 2.2.8 cDNA的克隆 | 第30页 |
| 2.2.9 丝状真菌总DNA提取 | 第30页 |
| 2.2.10 丝状真菌原生质体制备 | 第30-31页 |
| 2.2.11 丝状真菌原生质体的转化 | 第31-32页 |
| 2.2.12 丝状真菌胞内蛋白的提取 | 第32页 |
| 2.2.13 Southern blot | 第32-34页 |
| 2.2.14 酶活的测定 | 第34-39页 |
| 2.2.15 菌株表型分析 | 第39-40页 |
| 2.2.16 蛋白浓度的测定 | 第40-41页 |
| 第三章 结果与讨论 | 第41-72页 |
| 3.1 敲除PoligD基因提高草酸青霉基因打靶效率 | 第41-56页 |
| 3.1.1 基因PoligD缺失菌株△PoligD构建 | 第41-43页 |
| 3.1.2 草酸青霉△PoligD菌株生理生化特性 | 第43-46页 |
| 3.1.3 验证菌株△PoligD的基因打靶率 | 第46-51页 |
| 3.1.4 PoagaA、PoargB基因缺失突变株对氮源的利用 | 第51-53页 |
| 3.1.5 PoagaA作为筛选标记敲除Poku70基因 | 第53-55页 |
| 小结 | 第55-56页 |
| 3.2 PoVTA1基因对草酸青霉蛋白分泌的影响 | 第56-72页 |
| 3.2.1 Vta1p蛋白质序列进化树 | 第57页 |
| 3.2.2 PoVta1p细胞定位 | 第57-59页 |
| 3.2.3 PoVTA1基因敲除突变株的构建 | 第59-61页 |
| 3.2.4 △PoVTA1菌株形态表征 | 第61-64页 |
| 3.2.5 敲除PoVTA1基因对草酸青霉蛋白分泌的影响 | 第64-65页 |
| 3.2.6 敲除PoVTA1基因对草酸青霉纤维素酶以及半纤维素酶分泌的影响 | 第65-69页 |
| 3.2.7 敲除PoVTA1基因对草酸青霉淀粉酶分泌的影响 | 第69-71页 |
| 小结 | 第71-72页 |
| 参考文献 | 第72-86页 |
| 附录 | 第86-90页 |
| 致谢 | 第90-91页 |
| 攻读学位期间发表论文情况 | 第91页 |
