| 摘要 | 第4-5页 |
| Abstract | 第5页 |
| 1 引言 | 第10-21页 |
| 1.1 牛支原体病简介 | 第10-11页 |
| 1.2 牛支原体的病原学特性 | 第11-12页 |
| 1.2.1 牛支原体的形态特征 | 第11页 |
| 1.2.2 牛支原体的基因组学 | 第11页 |
| 1.2.3 牛支原体的生长及繁殖特性 | 第11-12页 |
| 1.2.4 牛支原体的理化特性 | 第12页 |
| 1.3 牛支原体病的流行病学 | 第12-13页 |
| 1.4 牛支原体病的临床症状 | 第13-14页 |
| 1.4.1 最急性 | 第13-14页 |
| 1.4.2 急性 | 第14页 |
| 1.4.3 慢性 | 第14页 |
| 1.5 牛支原体病的病理变化 | 第14页 |
| 1.6 牛支原体病的致病机理 | 第14-15页 |
| 1.7 牛支原体病的免疫机理 | 第15页 |
| 1.8 牛支原体病的诊断 | 第15-17页 |
| 1.8.1 病原的分离培养 | 第15-16页 |
| 1.8.2 血清学诊断 | 第16页 |
| 1.8.3 分子生物学诊断方法 | 第16-17页 |
| 1.9 牛支原体病的治疗 | 第17页 |
| 1.10 牛支原体病的防控措施 | 第17-18页 |
| 1.10.1 加强饲养管理 | 第17-18页 |
| 1.10.2 加强消毒工作 | 第18页 |
| 1.10.3 加强检疫监管 | 第18页 |
| 1.11 牛支原体病疫苗研究进展 | 第18-19页 |
| 1.12 实时荧光定量PCR | 第19-20页 |
| 1.12.1 实时荧光定量PCR简介 | 第19页 |
| 1.12.2 实时荧光定量PCR的类别 | 第19-20页 |
| 1.13 本研究的目的及意义 | 第20-21页 |
| 2 材料与方法 | 第21-27页 |
| 2.1 材料 | 第21页 |
| 2.1.1 菌株、病毒株及病原核酸 | 第21页 |
| 2.1.2 牛支原体病病牛鼻拭子临床样本 | 第21页 |
| 2.1.3 主要实验仪器 | 第21页 |
| 2.1.4 主要实验试剂 | 第21页 |
| 2.1.5 引物和探针 | 第21页 |
| 2.2 方法 | 第21-27页 |
| 2.2.1 牛支原体基因组DNA的提取 | 第22页 |
| 2.2.2 牛支原体种属特异性片段(OPPD/F)的扩增 | 第22页 |
| 2.2.3 目的片段的回收 | 第22-23页 |
| 2.2.4 目的片段与克隆载体的连接及转化感受态trans5α | 第23页 |
| 2.2.5 重组质粒提取及鉴定 | 第23-24页 |
| 2.2.6 重组阳性质粒拷贝数测定 | 第24页 |
| 2.2.7 荧光定量PCR反应体系及条件的优化 | 第24-25页 |
| 2.2.8 实时荧光定量PCR标准曲线的建立 | 第25页 |
| 2.2.9 实时荧光定量PCR的敏感性试验 | 第25页 |
| 2.2.10 荧光定量PCR的特异性试验 | 第25-26页 |
| 2.2.11 荧光定量PCR的重复性试验 | 第26页 |
| 2.2.12 实时荧光定量PCR方法临床样品检测 | 第26-27页 |
| 3 结果 | 第27-33页 |
| 3.1 重组质粒标准品的制备及鉴定结果 | 第27-28页 |
| 3.1.1 常规PCR的扩增结果 | 第27页 |
| 3.1.2 重组质粒鉴定结果 | 第27-28页 |
| 3.1.3 目的片段测序鉴定结果 | 第28页 |
| 3.1.4 质粒拷贝数计算结果 | 第28页 |
| 3.2 实时荧光定量PCR反应体系的建立结果 | 第28-33页 |
| 3.2.1 TaqMan实时荧光定量PCR反应体系及反应参数的优化结果 | 第28-29页 |
| 3.2.2 TaqMan实时荧光定量PCR标准曲线绘制结果 | 第29页 |
| 3.2.3 TaqMan实时荧光定量PCR敏感性试验结果 | 第29-30页 |
| 3.2.4 TaqMan实时荧光定量PCR特异性试验结果 | 第30页 |
| 3.2.5 TaqMan实时荧光定量PCR重复性试验结果 | 第30-32页 |
| 3.2.6 临床样品检测结果 | 第32-33页 |
| 4 讨论 | 第33-35页 |
| 5 结论 | 第35-36页 |
| 致谢 | 第36-37页 |
| 参考文献 | 第37-42页 |
| 作者简介 | 第42页 |
