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CRISPR/CAS9技术介导的人胰岛素(hINS)在牛成纤维细胞中定点整合的研究

摘要第4-6页
ABSTRACT第6-7页
缩略词表第11-13页
第一部分 综述部分第13-43页
    第一章 转基因生物反应器的研究进展第13-20页
        1 转基因动物制备的方法与技术第13-15页
        2 不同生物反应器第15-16页
        3 转基因动物生物反应器不同表达系统第16-18页
            3.1 血液第17页
            3.2 膀胱第17页
            3.3 精液第17-18页
            3.4 卵第18页
            3.5 乳腺第18页
        4 问题与展望第18-20页
    第二章 CRISPR/CAS介导的基因编辑技术第20-29页
        1 CRISPR/CAS9系统的发现第21-22页
        2 CRISPR/CAS系统的分类第22-25页
            2.1 CRISPR-cas9系统第23-25页
        3 CRISPR-CAS9技术的应用第25-28页
            3.1 基因编辑第25-26页
            3.2 在基因治疗中的应用第26-27页
            3.3 在转基因动物的应用第27-28页
        4 问题与展望第28-29页
    第三章 胰岛素的介绍及应用第29-33页
        1 胰岛素的发展第29页
        2 胰岛素及受体的功能与结构第29-31页
            2.1 胰岛素的功能第29页
            2.2 胰岛素的结构第29-30页
            2.3 胰岛素受体的作用第30页
            2.4 胰岛素受体的结构特点第30-31页
        3 胰岛素应用与展望第31-33页
            3.1.1 型糖尿病治疗第31-32页
            3.1.2 型糖尿病治疗第32-33页
    参考文献第33-43页
第二部分 实验研究部分第43-76页
    第一章 同源重组载体和CRISPR/CAS载体的构建第43-57页
        引言第43-44页
        材料与方法第44-49页
            1 实验材料第44-45页
            2 实验方法第45-49页
        结果第49-55页
            1 同源打靶载体鉴定第49-53页
            2 CRISPR/cas9载体构建活性检测第53-55页
        讨论第55-57页
    第二章 牛成纤维细胞转染及单克隆细胞的鉴定第57-71页
        前言第57-58页
        材料与方法第58-61页
            1 实验材料第58页
            2 实验方法第58-61页
        结果第61-69页
            1 牛胎儿成纤维细胞皮肤细胞分离和形态观察第61-62页
            2 牛胎儿成纤维细胞生长曲线绘制第62-63页
            3 转染条件筛选结果第63-64页
            4 单克隆细胞阳性筛选第64-65页
            5 单克隆细胞hINS和Neo基因鉴定第65-67页
            6 同源打靶载体片段完整性验证第67页
            7 同源重组验证第67-68页
            8 hINS基因在mRNA和Western Blot水平表达第68-69页
        讨论第69-71页
    参考文献第71-76页
结论第76-77页
致谢第77页

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