| 英文缩略词对照表 | 第9-11页 |
| 中文摘要 | 第11-13页 |
| Abstract | 第13-15页 |
| 1.前言 | 第16-22页 |
| 2.实验材料 | 第22-27页 |
| 2.1 细胞株 | 第22-23页 |
| 2.2 黑色素瘤病理标本 | 第23页 |
| 2.3 实验动物 | 第23页 |
| 2.4 主要试剂 | 第23-24页 |
| 2.5 主要仪器与设备 | 第24-25页 |
| 2.6 主要溶液和试剂的配制 | 第25-27页 |
| 3.实验方法 | 第27-43页 |
| 3.1 Real-time PCR检测MAT2B基因在5个恶性黑色素瘤细胞系中的表达情况 | 第27-28页 |
| 3.2 免疫组化检测MAT2B基因在原发或转移性恶性黑色素瘤以及痣标本中的表达情况 | 第28-30页 |
| 3.2.1 临床资料及病理标本的收集和石蜡切片的制作 | 第28-29页 |
| 3.2.2 病理标本的HE染色 | 第29页 |
| 3.2.3 病理标本的免疫组化染色 | 第29-30页 |
| 3.2.4 免疫组化结果的判断 | 第30页 |
| 3.3 慢病毒介导的MAT2B基因的RNA干扰 | 第30-37页 |
| 3.3.1 MAT2B基因RNA干扰序列以及阴性对照序列的确定 | 第30-31页 |
| 3.3.2 合成双链DNA oligo | 第31页 |
| 3.3.3 质粒载体的酶切及线性化 | 第31-32页 |
| 3.3.4 重组质粒的构建和鉴定 | 第32-33页 |
| 3.3.5 阳性菌的培养与质粒的抽提 | 第33-34页 |
| 3.3.6 慢病毒的包装、纯化与滴度测定 | 第34-35页 |
| 3.3.7 慢病毒感染人恶性黑色素瘤细胞系A375和Mel-RM .. 27 | 第35页 |
| 3.3.8 Real-time PCR检测慢病毒感染恶性黑色素瘤细胞系后，MAT2B基因m RNA水平变化 | 第35-36页 |
| 3.3.9 Western Blot检测慢病毒感染恶性黑色素瘤细胞系后，MAT2B蛋白水平变化 | 第36-37页 |
| 3.4 Celigo全自动细胞计数分析仪检测MAT2B基因敲减后，A375细胞生长情况的变化 | 第37页 |
| 3.5 MTT检测MAT2B基因敲减后黑色素瘤细胞的增殖情况 | 第37-38页 |
| 3.6 MAT2B基因敲减后黑色素瘤细胞克隆形成能力检测 | 第38-39页 |
| 3.7 流式细胞仪检测MAT2B基因敲减后恶性黑色素瘤细胞周期的变化 | 第39页 |
| 3.8 MAT2B基因敲减后恶性黑色素瘤细胞凋亡的变化 | 第39-40页 |
| 3.9 人恶性黑色素瘤细胞系A375裸鼠移植瘤模型的制作以及MAT2B基因敲减后裸鼠移植瘤生长情况 | 第40-41页 |
| 3.10 表达谱芯片检测MAT2B敲减后差异表达的基因 | 第41-42页 |
| 3.11 Real-time PCR和Western Blot对表达谱芯片检测结果进行验证 | 第42-43页 |
| 3.12 统计检验方法 | 第43页 |
| 4.实验结果 | 第43-80页 |
| 4.1 Real-time PCR检测MAT2B基因在5个人类恶性黑色素瘤细胞系中的表达情况 | 第43-46页 |
| 4.1.1 PCR反应的扩增曲线 | 第43-44页 |
| 4.1.2 PCR反应的溶解曲线 | 第44-45页 |
| 4.1.3 实时荧光定量PCR检测 | 第45-46页 |
| 4.2 免疫组化检测MAT2B基因在原发或转移性恶性黑色素瘤以及痣标本中的表达情况 | 第46-50页 |
| 4.2.1 痣、原发或转移性黑色素瘤标本的HE染色 | 第47页 |
| 4.2.2 痣、原发或转移性黑色素瘤标本的免疫组化染色 | 第47-50页 |
| 4.3 慢病毒介导的MAT2B基因的RNA干扰 | 第50-58页 |
| 4.3.1 MAT2B基因RNA干扰序列以及阴性对照序列的确定 | 第50-51页 |
| 4.3.2 合成双链DNA oligo | 第51页 |
| 4.3.3 质粒载体的酶切及线性化 | 第51-52页 |
| 4.3.4 重组质粒的构建和鉴定 | 第52-54页 |
| 4.3.5 纯化后慢病毒滴度测定 | 第54-55页 |
| 4.3.6 慢病毒感染人恶性黑色素瘤细胞系A375和Mel-RM | 第55页 |
| 4.3.7 Real-time PCR检测慢病毒感染后MAT2B基因m RNA水平变化 | 第55-57页 |
| 4.3.8 Western Blot检测慢病毒感染后，MAT2B蛋白水平变化 | 第57-58页 |
| 4.4 Celigo全自动细胞计数分析仪检测MAT2B基因敲减后细胞生长情况的变化 | 第58-60页 |
| 4.5 MTT检测MAT2B基因敲减后恶性黑色素瘤细胞的增殖情况 | 第60-62页 |
| 4.6 MAT2B基因敲减后恶性黑色素瘤细胞克隆形成能力检测 | 第62-63页 |
| 4.7 流式细胞仪检测MAT2B基因敲减后恶性黑色素瘤细胞周期的变化 | 第63-65页 |
| 4.8 MAT2B基因敲减后恶性黑色素瘤细胞凋亡的变化 | 第65-67页 |
| 4.9 MAT2B基因敲减后裸鼠移植瘤的生长情况 | 第67-69页 |
| 4.10 表达谱芯片检测MAT2B敲减后差异表达的基因 | 第69-77页 |
| 4.10.1 RNA样品的质检结果 | 第69-70页 |
| 4.10.2 表达谱芯片结果的IPA分析 | 第70-77页 |
| 4.11 Real-time PCR和Western Blot对表达谱芯片检测结果进行验证 | 第77-80页 |
| 5.讨论 | 第80-87页 |
| 6.结论 | 第87页 |
| 7.参考文献 | 第87-99页 |
| 附录 | 第99-100页 |
| 致谢 | 第100-101页 |
| 课题综述 | 第101-121页 |
| 参考文献 | 第113-121页 |
