| 摘要 | 第7-8页 |
| ABSTRACT | 第8-9页 |
| 第一章 绪论 | 第10-24页 |
| 1 IHNV概述 | 第11-17页 |
| 1.1 IHNV基因型分离株 | 第11页 |
| 1.2 IHNV的基因组特征 | 第11-12页 |
| 1.3 IHNV编码蛋白 | 第12-16页 |
| 1.4 IHNV的危害 | 第16-17页 |
| 2 IHN临床症状及流行特点 | 第17-18页 |
| 2.1 病鱼的临床症状 | 第17页 |
| 2.2 影响IHNV感染的因素 | 第17-18页 |
| 2.3 IHNV的传播途径 | 第18页 |
| 3 检测技术 | 第18-20页 |
| 3.1 细胞培养技术 | 第19页 |
| 3.2 免疫学技术 | 第19页 |
| 3.3 分子生物学技术 | 第19页 |
| 3.4 聚合酶链反应 | 第19页 |
| 3.5 环介导等温扩增技术 | 第19-20页 |
| 4 IHN的防治 | 第20-22页 |
| 4.1 感染IHNV后的免疫机制 | 第20-21页 |
| 4.2 疫苗 | 第21-22页 |
| 4.2.1 灭活病毒疫苗 | 第21页 |
| 4.2.2 基因工程亚单位疫苗 | 第21页 |
| 4.2.3 DNA疫苗 | 第21-22页 |
| 4.3 免疫佐剂 | 第22页 |
| 5 本研究的目的与意义 | 第22-24页 |
| 第二章 IHNV糖蛋白的截短表达 | 第24-42页 |
| 1 仪器与材料 | 第24-25页 |
| 1.1 实验仪器 | 第24-25页 |
| 1.2 实验材料 | 第25页 |
| 2 实验方法 | 第25-35页 |
| 2.1 IHNV截短G蛋白基因序列的选择 | 第25-26页 |
| 2.2 IHNV基因组RNA的提取 | 第26页 |
| 2.3 逆转录PCR | 第26-27页 |
| 2.4 PCR产物的纯化与回收 | 第27页 |
| 2.5 目的基因连接T载体 | 第27-29页 |
| 2.6 构建pET-27b-Gs重组表达质粒 | 第29-33页 |
| 2.6.1 引物设计 | 第29-30页 |
| 2.6.2 pMD18-T-Gs及pET-27b载体双酶切 | 第30页 |
| 2.6.3 产物回收 | 第30页 |
| 2.6.4 目的基因与质粒载体的连接 | 第30-31页 |
| 2.6.5 重组质粒的提取 | 第31-32页 |
| 2.6.6 重组表达质粒的鉴定 | 第32-33页 |
| 2.7 Gs蛋白的表达及纯化 | 第33-35页 |
| 2.7.1 Gs蛋白的初步表达 | 第33页 |
| 2.7.2 可溶表达条件摸索 | 第33-34页 |
| 2.7.3 Gs蛋白的大量表达 | 第34页 |
| 2.7.4 表达产物的SDS-PAGE分析 | 第34-35页 |
| 2.7.5 表达蛋白的复性以及纯化 | 第35页 |
| 3 实验结果 | 第35-40页 |
| 3.1 分析Gs蛋白基因 | 第35-37页 |
| 3.2 Gs蛋白基因的克隆及表达载体的构建 | 第37-38页 |
| 3.3 Gs蛋白的诱导表达 | 第38-39页 |
| 3.4 Gs蛋白的纯化 | 第39-40页 |
| 4 讨论 | 第40-42页 |
| 4.1 G蛋白目的基因片段的选择 | 第40页 |
| 4.2 表达载体的选择 | 第40-41页 |
| 4.3 包涵体 | 第41-42页 |
| 第三章 IHNV截短糖蛋白的免疫原性检测 | 第42-48页 |
| 1 仪器与材料 | 第42-43页 |
| 1.1 实验仪器 | 第42-43页 |
| 1.2 实验材料 | 第43页 |
| 2 实验方法 | 第43-44页 |
| 2.1 兔抗血清的制备 | 第43页 |
| 2.2 IHNV-Gs蛋白抗血清效价的检测 | 第43-44页 |
| 2.3 间接免疫荧光(IFA)检测 | 第44页 |
| 3 实验结果 | 第44-48页 |
| 3.1 IHNV-Gs蛋白抗血清效价的检测 | 第44-45页 |
| 3.2 间接免疫荧光检测免疫原性 | 第45-48页 |
| 全文总结 | 第48-50页 |
| 参考文献 | 第50-56页 |
| 致谢 | 第56-58页 |
| 附录 | 第58-60页 |