| 摘要 | 第8-10页 |
| 第一章 文献综述 | 第10-29页 |
| 1 线粒体与细胞凋亡的研究现状 | 第10-15页 |
| 1.1 线粒体细胞色素C与细胞凋亡 | 第11-13页 |
| 1.2 线粒体膜电位与细胞凋亡 | 第13-14页 |
| 1.3 线粒体片段化与细胞凋亡 | 第14-15页 |
| 2 Wnt/β-catenin通路与恶性肿瘤关系的研究进展 | 第15-21页 |
| 2.1 经典wnt通路的正性调节因子 | 第16-19页 |
| 2.2 经典wnt通路的负性调节因子 | 第19-21页 |
| 3 齐墩果酸及其衍生物的研究进展 | 第21-23页 |
| 参考文献 | 第23-29页 |
| 第二章 齐墩果酸衍生物通过线粒途径诱导人肝 | 第29-57页 |
| 1 试验材料 | 第30-34页 |
| 1.1 主要试剂 | 第30页 |
| 1.2 试剂配制 | 第30-32页 |
| 1.3 试验仪器 | 第32页 |
| 1.4 试验药物 | 第32-33页 |
| 1.5 细胞 | 第33-34页 |
| 1.5.1 来源 | 第33页 |
| 1.5.2 细胞培养 | 第33页 |
| 1.5.3 细胞传代 | 第33页 |
| 1.5.4 细胞冻存 | 第33-34页 |
| 1.5.5 复苏细胞 | 第34页 |
| 2 试验方法 | 第34-40页 |
| 2.1 齐墩果酸衍生物药效学检测 | 第34-35页 |
| 2.1.1 药物的溶解和配制 | 第34页 |
| 2.1.2 MTT法测定抑制率 | 第34页 |
| 2.1.3 观测肝癌细胞SMMC-7721病变效应 | 第34页 |
| 2.1.4 分组设置 | 第34-35页 |
| 2.2 细胞膜完整性的检测 | 第35页 |
| 2.3 Bcl-2、Bax、c-9、c-3蛋白的免疫印迹检测 | 第35-38页 |
| 2.3.1 总蛋白样品的制备 | 第35-36页 |
| 2.3.2 SDS-PAGE电泳 | 第36-37页 |
| 2.3.3 转膜 | 第37页 |
| 2.3.4 封闭 | 第37页 |
| 2.3.5 一抗孵育 | 第37页 |
| 2.3.6 二抗孵育 | 第37页 |
| 2.3.7 蛋白检测 | 第37-38页 |
| 2.4 细胞内ATP测定 | 第38页 |
| 2.5 线粒体膜电位的测量(△ψm) | 第38-39页 |
| 2.6 Cyt-c(Cyt-C)释放的检测 | 第39-40页 |
| 2.7 数据统计与分析 | 第40页 |
| 3 结果 | 第40-51页 |
| 3.1 齐墩果酸衍生物对人肝癌细胞SMMC-7721和人肝细胞HL-7702增殖的影响 | 第40-43页 |
| 3.2 齐墩果酸衍生物对SMMC-7721细胞形态学的影响 | 第43页 |
| 3.3 齐墩果酸衍生物对SMMC-7721细胞胞膜完整性的影响 | 第43-45页 |
| 3.4 齐墩果酸衍生物激活内在凋亡途径而诱导SMMC-7721细胞发生凋亡 | 第45-47页 |
| 3.5 齐墩果酸衍生物对SMMC-7721细胞内ATP水平的影响 | 第47页 |
| 3.6 齐墩果酸衍生物对SMMC-7721细胞内线粒体膜电位(△ψm)的影响 | 第47-49页 |
| 3.7 齐墩果酸衍生物诱导Cyt-C从线粒体释放 | 第49-51页 |
| 4 分析与讨论 | 第51-53页 |
| 5 小结 | 第53-54页 |
| 参考文献 | 第54-57页 |
| 第三章 齐墩果酸衍生物在人肝癌SMMC-7721细胞中抑制了Wnt/β-catenin信号通路的研究 | 第57-80页 |
| 1 试验材料 | 第59-62页 |
| 1.1 主要试剂 | 第59页 |
| 1.2 试剂配制 | 第59-61页 |
| 1.3 试验仪器 | 第61-62页 |
| 2 试验方法 | 第62-69页 |
| 2.1 人SMMC-7721细胞的传代培养、冻存及复苏方法 | 第62页 |
| 2.2 普通PCR检测目的基因 | 第62-65页 |
| 2.2.1 引物设计 | 第62页 |
| 2.2.2 样品制备 | 第62-63页 |
| 2.2.3 提取细胞总RNA | 第63页 |
| 2.2.4 合成cDNA | 第63-65页 |
| 2.3 荧光定量PCR技术检测目的基因的护增 | 第65页 |
| 2.4 Western blot | 第65-68页 |
| 2.4.1 总蛋白的提取 | 第65-66页 |
| 2.4.2 核蛋白和胞浆蛋白的提取 | 第66页 |
| 2.4.3 磷酸化蛋白的提取 | 第66-67页 |
| 2.4.4 蛋白浓度的测定 | 第67页 |
| 2.4.5 SDS电泳 | 第67-68页 |
| 2.5 数据统计与分析 | 第68-69页 |
| 3 结果 | 第69-78页 |
| 3.1 荧光定量PCR测定结果 | 第69-73页 |
| 3.1.1 细胞总RNA提取与检测 | 第69页 |
| 3.1.2 普通PCR电泳验证目的基因片段 | 第69-70页 |
| 3.1.3 荧光定量PCR目的基因特异性验证 | 第70-71页 |
| 3.1.4 荧光定量PCR产物测序验证 | 第71页 |
| 3.1.5 不同时间点齐墩果酸衍生物对β-catenin、c-myc、cyclinD1基因mRNA表达量的影响 | 第71-73页 |
| 3.2 WB结果 | 第73-78页 |
| 4 分析与讨论 | 第78-79页 |
| 5 小结 | 第79-80页 |
| 参考文献 | 第80-83页 |
| 全文结论 | 第83-84页 |
| 创新 | 第84-85页 |
| 附录 | 第85-86页 |
| Abstract | 第86-87页 |
| 致谢 | 第88页 |
